24小时热门版块排行榜    

查看: 2394  |  回复: 6

linerlove114

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人测过NAD(P)H-醌还原酶(NADPH quinone reductase)的活性吗?

有人测过NAD(P)H-醌还原酶活性吗?我不知道这样翻译是不是准确,英文表述是
NADPH quinone reductase。 文献上给的体系是20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.2 mM NADPH or NADH, 0.1 mM quinone(醌)和1ul的酶液,然后用分光光度计测吸光值变化。可是醌是水不溶的啊,其他明显是水溶的,怎么反应啊?需要用什么有机溶剂溶解醌类与水互溶,同时又不影响酶活性?求助高手!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
linerlove114: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-01 17:26:37
先配好Tris缓冲液。NADPH/NADH和醌是反应底物,测定时加样品后现加的。醌是用有机溶剂溶解的,可以用乙醇、甲醇或者DMSO先配置成浓缩的母液。
2楼2012-11-30 07:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linerlove114

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-30 07:10:05
先配好Tris缓冲液。NADPH/NADH和醌是反应底物,测定时加样品后现加的。醌是用有机溶剂溶解的,可以用乙醇、甲醇或者DMSO先配置成浓缩的母液。

非常感谢~你一定做过这个啦?乙醇、甲醇、DMSO不会影响蛋白活性吗?NADPH/NADH直接用水溶就可以吗?还是要用某种缓冲液溶解?
3楼2012-12-01 17:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


linerlove114: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-02 12:45:51
NADPH/NADH溶解在水里面,分装成小管,保存在-20°C,不要反复冻化。有机溶剂当然可能对酶活有一定影响,所以用量一定要少。一般根据实验需要醌配成100×或者200×的母液。
4楼2012-12-02 03:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linerlove114

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-02 03:26:48
NADPH/NADH溶解在水里面,分装成小管,保存在-20°C,不要反复冻化。有机溶剂当然可能对酶活有一定影响,所以用量一定要少。一般根据实验需要醌配成100×或者200×的母液。

十分感谢~
5楼2012-12-02 12:45:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linerlove114

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by linerlove114 at 2012-12-01 17:25:51
非常感谢~你一定做过这个啦?乙醇、甲醇、DMSO不会影响蛋白活性吗?NADPH/NADH直接用水溶就可以吗?还是要用某种缓冲液溶解?...

你好,按照你上次跟我说的方法,用乙醇和DMSO溶过醌类,首先,我用的辅酶Q10和维生素K3在乙醇中溶解度挺小的,所以配的浓度并不高,然后按文献上给的浓度算好加一定体积进去之后,溶液就变浑浊了,这是怎么回事?浑浊会影响吸光值测定吧?
6楼2013-02-21 17:21:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LIVESOCCER

金虫 (正式写手)

楼主能给一下这个酶活性测定的方法文献么,感谢啊!
7楼2019-09-26 11:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linerlove114 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 各位大神,目前国内有哪些比较好用的逆合成软件? 20+3 zapen 2026-09-15 7/350 2026-09-17 16:40 by 北京莱茵编辑
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 15:29 by 0ngsZVSCTS7z
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:27 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:53 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:51 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-17 13:39 by ObVzqQQh1rrE
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-17 13:17 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 11:27 by UAIjTRMuUFoj
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:52 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:04 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:28 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-17 01:50 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 19:15 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
信息提示
请填处理意见