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Cllair

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 18.6小时
虫号: 2141978
注册: 2012-11-22
性别: MM
专业: 生物信息学

[求助] pcr实验相关

我想从青霉里面克隆菊粉酶基因，之前退火在42度的时候做出来过，但是觉得条带浅没有回收，但是不知道为什么后来重复了几百组实验都没有在做出来过。引物的Tm值是51.65，我从40到60度来来回回的试了很多遍了。为什么会做不出来了呢？麻烦大家江湖急救一下，给的指导吧。

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有今生没来世，且行且珍惜。

1楼 2012-11-28 22:35:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

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专业: 作物分子育种

【答案】应助回帖

引用回帖:

18楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-04 12:28:41
原始序列已经拿到了，就是从起始密码到终止密码的序列，单从序列看他引物设计没有问题，基因库中该属的基因就两个，一个是前体一个是基因，他是根据基因的序列设计的。我想知道前体和基因什么差别，是不是能按照前 ...

前体只是没有经过修饰的。既然两个序列都有，为什么不比对下用保守区设计呢？