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wlf200501

新虫 (正式写手)

[求助] 目的基因内部含有与表达载体相同的酶切位点

如图，我要把我的目的片段连接到这个表达载体内部，但是这个载体在构建的时候目标基因两端只有NcolⅠ和HindⅢ這兩個酶切位点，可是我的目的基因内有HindⅢ酶切位点，目前我的目的片段已经连接到克隆载体上面了（只是简单连接到pEASY-T1 simple cloning kit，目的基因两端还未加任何酶切位点）这就有个问题了，用酶切从克隆载体上面切我的目的片段的时候会把我的基因也给切断啊，这该怎么办呢？大侠支支招啊。

表达载体图.png
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爱科学
1楼 2012-11-28 10:33:57
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-28 13:53:13
wlf200501: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢帮助，目前我能想到的也是第二个方案了 2012-11-28 14:13:39
有两种方法可供选择:
1.可以买一种In-fusion的试剂盒,目的片断不需要酶切,直接进行克隆，具体的操作方法可以看一下他们的说明.
2.将载体上的 HindIII---phaT---KpnI这部分序列扩增下来，加到你的目的序列上，然后用NcoI和KpnI进行酶切克隆。
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北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
2楼2012-11-28 11:01:45
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