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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 电化学 » 电化学传感器 » EDC/NHS活化金电极-硫醇后抗体固定不上
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onlycwt

铜虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by sailorlanyu at 2012-11-30 10:42:46
不怕，氮气吹不会把硫醇吹坏。EDC/NHS是要现配的。然后体系下，处理金电极的时候，不要加热到80度在硫酸/双氧水中超声。我们实验室就弄废过电极。泡着超声就好，别加热...

请问EDC/NHS溶液直接用水配还是用缓冲溶液呢，pH是多少比较好啊？我看有人用0.1M MES pH 6缓冲溶液,昨天我试了PBS pH 6的缓冲溶液活化效果不好。
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11楼2012-11-30 11:24:15
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天堂方向

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onlycwt onlycwt
12楼2012-12-02 20:07:44
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onlycwt

铜虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by 天堂方向 at 2012-12-02 20:07:44
需要用缓冲液。
至于pH用多少要看你的实验。
如果一般链接反应大家做的实验有两种，一种是一锅法，直接加入EDC/NHS，溶液中的带氨基和带羧基的化合物直接活化反应，这步要避免使用带氨基或羟基的缓冲液，一般pH在 ...

太感谢了，你一言顶我看好多文献总结。
我的是分两步反应的，先活化，再滴涂抗体。
请问第一步活化的缓冲剂有要求吗？用PBS，还是MES，还是盐酸-咪唑缓冲溶液？第二步修饰抗体使用的缓冲溶液是PBS吗？
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13楼2012-12-02 22:08:25
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12楼: Originally posted by 天堂方向 at 2012-12-02 20:07:44
需要用缓冲液。
至于pH用多少要看你的实验。
如果一般链接反应大家做的实验有两种，一种是一锅法，直接加入EDC/NHS，溶液中的带氨基和带羧基的化合物直接活化反应，这步要避免使用带氨基或羟基的缓冲液，一般pH在 ...

14楼2012-12-02 22:10:28
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天堂方向

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onlycwt onlycwt
15楼2012-12-04 20:22:08
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15楼: Originally posted by 天堂方向 at 2012-12-04 20:22:08
只要避免使用带氨基和羟基的。MES或1-甲基咪唑-HCl Buffer都可以。我用的后者。
第二步连接倒是感觉均可。用PBS或Tris-HCl都可以。
...

上次试了MES buffer不太行，请问咪唑缓冲溶液的浓度用多少呢？
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16楼2012-12-09 18:41:00
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15楼: Originally posted by 天堂方向 at 2012-12-04 20:22:08
只要避免使用带氨基和羟基的。MES或1-甲基咪唑-HCl Buffer都可以。我用的后者。
第二步连接倒是感觉均可。用PBS或Tris-HCl都可以。
...

对啦，这位大侠，是不是只能用1-甲基咪唑不能用咪唑配缓冲溶液呢？因为咪唑貌似带胺基。
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17楼2012-12-09 20:26:20
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18楼2012-12-10 11:20:40
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19楼2012-12-10 11:21:30
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19楼: Originally posted by 天堂方向 at 2012-12-10 11:21:30
0.1 M 1-甲基咪唑...

太谢谢啦~我好多问题啊，还有，你用的是浸泡法还是滴涂法修饰抗体呢？
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20楼2012-12-18 16:02:49
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