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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 电化学 » 电化学传感器 » EDC/NHS活化金电极-硫醇后抗体固定不上
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onlycwt

铜虫 (小有名气)

[求助] EDC/NHS活化金电极-硫醇后抗体固定不上

最近在做生物传感器，按照如下步骤进行，但不知为什么抗体修饰不上去，请大侠帮我看看哪里有问题：
1、预处理金电极：化学抛光+电化学抛光
2、10毫摩 11-巯基十一烷酸乙醇溶液中避光浸泡3小时
3、75mM/15mM  EDC/NHS水溶液浸泡1小时
4、电极自然晾干后滴加20uL 0.5mg/ml BSA水溶液，封装好在37°下反应1小时或4°下12小时（暂时用便宜的BSA代替抗体，看能不能修饰上）
5、将电极轻轻浸入双蒸水1分钟，取出后测试
--------------------------------------------------------------------
不知道为什么就是不能修饰上去，EDC/NHS 活化那步电阻变小很多，跟文献相符，但不知带是否活化成功。

请帮忙看看哪里出了问题
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
1楼 2012-11-27 20:53:10
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onlycwt

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by sailorlanyu at 2012-11-30 10:42:46
不怕，氮气吹不会把硫醇吹坏。EDC/NHS是要现配的。然后体系下，处理金电极的时候，不要加热到80度在硫酸/双氧水中超声。我们实验室就弄废过电极。泡着超声就好，别加热...

请问EDC/NHS溶液直接用水配还是用缓冲溶液呢，pH是多少比较好啊？我看有人用0.1M MES pH 6缓冲溶液,昨天我试了PBS pH 6的缓冲溶液活化效果不好。
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
11楼2012-11-30 11:24:15
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onlycwt

铜虫 (小有名气)
另外，EDC/NHS溶液是混合在一起用还是分开，活化的时候需要现配吗？
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
2楼2012-11-27 20:55:17
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Jackcd12

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
onlycwt: 金币+5 2012-11-27 21:19:18
硫醇在Au表面的自组装方法虽已使用20年了，看似简单，但要获得满意的单分子膜却不是想象的那么容易。这个自组装过程中最关键的要素是保证Au表面的干净（无污染），其它的都很简单。因此，你如果是Au棒（不是Au薄膜）电极，出来起来就大胆些，采用强氧化(浓H2SO4+H2O2, 80C, 超声5-10min)，水清洗后，乙醇洗，马上放入硫醇中，尽量避免Au与污浊的空气接触，组装时间过夜更好。
不要忙于下一步，首先应该检测自组装效果，最好用铁氰化钾的CV法（阻抗谱）测试，可以后，表面这种预处理方法有效，以后采用。
然后，再重复一次，或几次，再往下走。
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Themoreamanlearns,themoreheknowshisignorance!
3楼2012-11-27 21:03:59
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onlycwt

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Jackcd12 at 2012-11-27 21:03:59
硫醇在Au表面的自组装方法虽已使用20年了，看似简单，但要获得满意的单分子膜却不是想象的那么容易。这个自组装过程中最关键的要素是保证Au表面的干净（无污染），其它的都很简单。因此，你如果是Au棒（不是Au薄膜） ...

做了实验，发现自组装3小时和自组装14小时的电阻几乎一样，所以采用3小时，怎样知道硫醇组装的好还是坏，电阻都是那么大。
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
4楼2012-11-27 21:23:42
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