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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 电化学 » 电化学传感器 » EDC/NHS活化金电极-硫醇后抗体固定不上
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onlycwt

铜虫 (小有名气)

[求助] EDC/NHS活化金电极-硫醇后抗体固定不上

最近在做生物传感器，按照如下步骤进行，但不知为什么抗体修饰不上去，请大侠帮我看看哪里有问题：
1、预处理金电极：化学抛光+电化学抛光
2、10毫摩 11-巯基十一烷酸乙醇溶液中避光浸泡3小时
3、75mM/15mM  EDC/NHS水溶液浸泡1小时
4、电极自然晾干后滴加20uL 0.5mg/ml BSA水溶液，封装好在37°下反应1小时或4°下12小时（暂时用便宜的BSA代替抗体，看能不能修饰上）
5、将电极轻轻浸入双蒸水1分钟，取出后测试
--------------------------------------------------------------------
不知道为什么就是不能修饰上去，EDC/NHS 活化那步电阻变小很多，跟文献相符，但不知带是否活化成功。

请帮忙看看哪里出了问题
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
1楼 2012-11-27 20:53:10
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onlycwt

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by 天堂方向 at 2012-12-02 20:07:44
需要用缓冲液。
至于pH用多少要看你的实验。
如果一般链接反应大家做的实验有两种，一种是一锅法，直接加入EDC/NHS，溶液中的带氨基和带羧基的化合物直接活化反应，这步要避免使用带氨基或羟基的缓冲液，一般pH在 ...

太感谢了，你一言顶我看好多文献总结。
我的是分两步反应的，先活化，再滴涂抗体。
请问第一步活化的缓冲剂有要求吗？用PBS，还是MES，还是盐酸-咪唑缓冲溶液？第二步修饰抗体使用的缓冲溶液是PBS吗？
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
13楼2012-12-02 22:08:25
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查看全部 25 个回答

onlycwt

铜虫 (小有名气)
另外，EDC/NHS溶液是混合在一起用还是分开，活化的时候需要现配吗？
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
2楼2012-11-27 20:55:17
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Jackcd12

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
onlycwt: 金币+5 2012-11-27 21:19:18
硫醇在Au表面的自组装方法虽已使用20年了，看似简单，但要获得满意的单分子膜却不是想象的那么容易。这个自组装过程中最关键的要素是保证Au表面的干净（无污染），其它的都很简单。因此，你如果是Au棒（不是Au薄膜）电极，出来起来就大胆些，采用强氧化(浓H2SO4+H2O2, 80C, 超声5-10min)，水清洗后，乙醇洗，马上放入硫醇中，尽量避免Au与污浊的空气接触，组装时间过夜更好。
不要忙于下一步，首先应该检测自组装效果，最好用铁氰化钾的CV法（阻抗谱）测试，可以后，表面这种预处理方法有效，以后采用。
然后，再重复一次，或几次，再往下走。
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Themoreamanlearns,themoreheknowshisignorance!
3楼2012-11-27 21:03:59
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onlycwt

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Jackcd12 at 2012-11-27 21:03:59
硫醇在Au表面的自组装方法虽已使用20年了，看似简单，但要获得满意的单分子膜却不是想象的那么容易。这个自组装过程中最关键的要素是保证Au表面的干净（无污染），其它的都很简单。因此，你如果是Au棒（不是Au薄膜） ...

做了实验，发现自组装3小时和自组装14小时的电阻几乎一样，所以采用3小时，怎样知道硫醇组装的好还是坏，电阻都是那么大。
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
4楼2012-11-27 21:23:42
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