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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » BCA检测蛋白浓度负值怎么回事
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happyzxj718

新虫 (初入文坛)

[求助] BCA检测蛋白浓度负值怎么回事

虫虫们，最近用BCA试剂盒检测溶液内蛋白含量，蛋白浓度应该很低，计算后浓度是负数呢，什么意思呀，求指点。急呀。
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1楼 2012-11-25 21:08:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-11-26 07:10:47
你是否做了样品buffer的对照？buffer里有些成分可能造成吸光值下降。如果buffer的负值不是很大的情况下，你可以直接测定含有同样量的buffer下的吸光值（假定为负），然后用测定样品的吸光值扣除这个负对照，然后再根据标准曲线计算。或者，你也可以把做标准曲线的BSA的样品也加入同样量的buffer。祝你好运！
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2楼2012-11-26 05:37:02
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是你用的标准曲线或者参比不太对哦……要是你参比用错了的话，比如参比有挺高的吸收的话，会拉低你的样品吸光度，算出来就可能是负值
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3楼2012-11-26 08:18:00
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happyzxj718

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-26 05:37:02
你是否做了样品buffer的对照？buffer里有些成分可能造成吸光值下降。如果buffer的负值不是很大的情况下，你可以直接测定含有同样量的buffer下的吸光值（假定为负），然后用测定样品的吸光值扣除这个负对照，然后再根 ...

谢谢你的回复。我用的碧云天的试剂盒，按照说明书步骤来做的，标曲R2在0.96左右。蛋白浓度低会不会出现负值这种情况呢
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4楼2012-11-26 19:22:19
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happyzxj718

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-26 08:18:00
是不是你用的标准曲线或者参比不太对哦……要是你参比用错了的话，比如参比有挺高的吸收的话，会拉低你的样品吸光度，算出来就可能是负值

你好，谢谢你的回复。我实验的标准曲线R2在0.96左右。蛋白浓度很低，最低的可能小于1ug/ml.会不会不能检测到呢
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5楼2012-11-26 19:25:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by happyzxj718 at 2012-11-26 19:22:19
谢谢你的回复。我用的碧云天的试剂盒，按照说明书步骤来做的，标曲R2在0.96左右。蛋白浓度低会不会出现负值这种情况呢...

一般做标准曲线是用BSA溶解在水里的，你蛋白样品的buffer往往有蔗糖啊或者其他还原性物质来保护蛋白，BCA对这些比其他方法要敏感。我不知道具体你的样品是溶在什么buffer里的，所以不好定论。但是你一定要检测一下样品BUFFER在检测方法下是否为0，这是所有定量蛋白浓度方法所必需的。
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6楼2012-11-27 07:02:47
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lynet

银虫 (初入文坛)
不是调零没调好呀？我之前也是试过这样，再重新调一次零，就没负值了。
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7楼2012-11-27 09:03:35
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
蛋白浓度低于试剂盒检测下限
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8楼2012-11-27 11:29:25
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happyzxj718

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-27 07:02:47
一般做标准曲线是用BSA溶解在水里的，你蛋白样品的buffer往往有蔗糖啊或者其他还原性物质来保护蛋白，BCA对这些比其他方法要敏感。我不知道具体你的样品是溶在什么buffer里的，所以不好定论。但是你一定要检测一下 ...

万分感激
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9楼2012-11-27 21:49:30
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happyzxj718

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lynet at 2012-11-27 09:03:35
不是调零没调好呀？我之前也是试过这样，再重新调一次零，就没负值了。

谢啦，我重新调零
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10楼2012-11-27 21:50:11
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