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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体构建 碱基突变 缺失 原因
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 表达载体构建 碱基突变 缺失 原因

最近做表达载体构建，总是出现碱基缺失和突变，而且总有突变成终止密码子的情况，请教各位前辈，这到底是怎么回事啊？？？？ 望不吝赐教
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1楼 2012-11-25 15:44:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果目的片段不大，用什么酶都应该可以的，但PCR尽量不要采用过高的循环数。如果目的片段较长，建议使用高保真酶。
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7楼2012-11-26 05:48:05
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-11-25 20:33:17
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.
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北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
2楼2012-11-25 17:51:43
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是PCR出现突变，就是Taq酶的问题，建议换个高保真的
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
3楼2012-11-25 19:30:43
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by polepolar at 2012-11-25 17:51:43
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.

“很有可能突变后的序列对E.coli有毒”，这个是什么意思？？转化后升温生长，是指涂了平板以后，不在37°过夜，在室温培养出单克隆吗？？谢谢
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4楼2012-11-25 19:31:11
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