应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体构建 碱基突变 缺失 原因
汕头大学海洋科学接受调剂
241/3返回列表123下一页
查看: 2474  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 表达载体构建 碱基突变 缺失 原因

最近做表达载体构建，总是出现碱基缺失和突变，而且总有突变成终止密码子的情况，请教各位前辈，这到底是怎么回事啊？？？？ 望不吝赐教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-25 15:44:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-26 10:16:34
加A的肯定不是高保真。。。...

我看说明书上写的好像是中混合酶  因为我那个是改良的载体 跟t载体似的，我合计加a正好啊   它跟我之前用的一个酶  我看保真性写的一样的啊
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2012-11-26 10:34:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-11-25 20:33:17
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.
赞一下 回复此楼
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
2楼2012-11-25 17:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是PCR出现突变，就是Taq酶的问题，建议换个高保真的
赞一下 回复此楼
每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
3楼2012-11-25 19:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by polepolar at 2012-11-25 17:51:43
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.

“很有可能突变后的序列对E.coli有毒”，这个是什么意思？？转化后升温生长，是指涂了平板以后，不在37°过夜，在室温培养出单克隆吗？？谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-25 19:31:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhoulubin at 2012-11-25 19:30:43
如果是PCR出现突变，就是Taq酶的问题，建议换个高保真的

你好 我用的是pcr产物回收以后直接连接的表达载体，是不是很有可能是酶的问题啊
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-25 20:01:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-11-25 20:33:20
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-11-25 20:33:35
我想细致了解一下，你做克隆的具体过程，需要你提供几个参数
1. 你用的是什么酶？
2. PCR时的循环是多少？
3. 你目标序列的长度是多少？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2012-11-25 20:22:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果目的片段不大，用什么酶都应该可以的，但PCR尽量不要采用过高的循环数。如果目的片段较长，建议使用高保真酶。
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-26 05:48:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
突变成终止密码子的概率挺大的……
问题肯定是出在PCR，假如你用的胶回收的话还有可能是紫外照太久了……
要么还是用高保真酶吧，你这出现概率挺大的话说明你的片段不怎么短
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-26 08:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-25 20:22:10
我想细致了解一下，你做克隆的具体过程，需要你提供几个参数
1. 你用的是什么酶？
2. PCR时的循环是多少？
3. 你目标序列的长度是多少？

我用的全式金的 trans taq T DNA polymerase，看说明书上说也是高保真酶啊 ，

PCR是35循环
目标序列有的1kb有的2kb
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-26 08:51:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhoulubin at 2012-11-25 19:30:43
如果是PCR出现突变，就是Taq酶的问题，建议换个高保真的

我用的酶也是说是高保真的，还加A呢 到底保真性需要到什么程度才可以啊
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-26 08:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 芥末猫 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大）接受跨专业 +10 相信必会光芒万� 2026-04-13 10/500 2026-04-14 09:28 by 带壳的鸡蛋
[考研] 求调剂 +15 雪逢冬 2026-04-10 15/750 2026-04-14 08:47 by 木木mumu～
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +37 xaw. 2026-04-11 38/1900 2026-04-14 08:29 by 科宇老师
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +4 双一流本科机械 2026-04-08 4/200 2026-04-14 07:32 by Abskk
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 化学070300 求调剂 +21 哈哈哈^_^ 2026-04-12 21/1050 2026-04-13 21:36 by nxybio2007
[考研] 调剂 +27 不逢春 2026-04-07 28/1400 2026-04-13 20:19 by xxy88888
[考研] 297工科，求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[教师之家] 请问地理、遥感方面，可以做哪些横向项目啊，纵向完不成考核啊 +3 锦衣卫寒战 2026-04-07 5/250 2026-04-11 20:51 by 豫椒
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 087100初试311求调剂 +4 任雅琴 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:33 by zhq0425
[考研] 283求调剂，工科！ +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 085402通信工程调剂，有4项学科竞赛国奖（电赛国二），硕士研究生调剂自荐信。 +5 m永o不v言o弃m 2026-04-09 5/250 2026-04-11 09:33 by zhq0425
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 求调剂材料科学与工程一志愿985初试365分 +5 材化李可 2026-04-08 5/250 2026-04-09 17:00 by Lilly_Li
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 328求调剂 +17 lftmya 2026-04-07 18/900 2026-04-09 08:05 by 5268321
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭