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表达载体构建 碱基突变 缺失 原因
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芥末猫
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表达载体构建 碱基突变 缺失 原因
最近做表达载体构建,总是出现碱基缺失和突变,而且总有突变成终止密码子的情况,请教各位前辈,这到底是怎么回事啊???? 望不吝赐教
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2012-11-25 15:44:51
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看天
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15楼
:
Originally posted by
Marado
at 2012-11-26 11:11:13
你那个应该是taq+pfu的混合酶,保真能力比pfu差,但要比taq好,纯高保真酶的话是不会加A的,反而会切掉A尾,很多国产公司都在推销这种混合酶,我用过天根的taq plus,很烂,加A效率奇差,还不如pfu扩增自己加A,我 ...
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23楼
2012-11-27 19:51:06
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polepolar
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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。
2012-11-25 20:33:17
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.
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2楼
2012-11-25 17:51:43
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zhoulubin
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【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
如果是PCR出现突变,就是Taq酶的问题,建议换个高保真的
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每个年龄都有其最应该做的事,但只有过了那个年龄自己才知道
3楼
2012-11-25 19:30:43
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专业: 水产生物遗传育种学
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2楼
:
Originally posted by
polepolar
at 2012-11-25 17:51:43
从你的描述来看,很有可能突变后的序列对E.coli有毒,缺失和突变成终止密码子都是把序列的阅读框改变,以此来保护自己.建议转化后室温生长或者换其它感受细胞试试.
“很有可能突变后的序列对E.coli有毒”,这个是什么意思??转化后升温生长,是指涂了平板以后,不在37°过夜,在室温培养出单克隆吗??谢谢
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4楼
2012-11-25 19:31:11
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