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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

[求助] 为何CTAB法提取的DNA总是断裂? 已有1人参与

最近一直提取的植物总DNA总是断裂,使用的是自己配制的溶液,用改良的CTAB法,提取过程已经很小心了,没有剧烈震荡,可是总是提到断裂的DNA 是什么原因呢?下图是我提的DNA 跑的0.8%琼脂糖凝胶电泳!急希望各位虫虫帮忙解答!

IMG_20121123_103631.jpg
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haha
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羿秋轩主人

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
36楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-30 17:26:33
1,称0.2-0.5g叶于预冷的研钵中快速研磨(研磨中加有10mg左右的PVP),研细后加入1ml的提取缓冲液(100mmol/l Tris-Hcl,50mmol/ledta,700mmol/lNacl,2%巯基乙醇,2%PVP)摇匀,在冰上静置10min.
2,取出离心管500 ...

喔,现在还有用经典方法不用试剂盒的,太牛了~~~
玩笑话啦不要介意。
说正经的,看方案没啥问题,楼主你有没有考虑过操作手法问题?
41楼2015-02-18 15:16:23
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shuishui007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
??是DNA断裂,是????大,RNA没消化,太多了。上???是DNA,下???分??????的2-3???带是RNA,用RNase消化一下就??会有了。???外,DNA沉淀???,4000-6000rpm离心??????。
2楼2012-11-24 20:48:19
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shuishui007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不是DNA断裂,是RNA没消化。上面的一条带是DNA,下面2-3条带是RNA,RNase消化一下就没有了。另外DNA沉淀后用4000-6000rpm离心就可以了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-11-24 20:52:44
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by shuishui007 at 2012-11-24 20:52:44
不是DNA断裂,是RNA没消化。上面的一条带是DNA,下面2-3条带是RNA,RNase消化一下就没有了。另外DNA沉淀后用4000-6000rpm离心就可以了。

谢谢,那我加RNA酶是一下!
haha
4楼2012-11-25 14:12:31
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