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fuyin

新虫 (初入文坛)

[求助] 干涉载体构建

为什么在构建干涉载体时总是连接上一边后另外一边掉了,我做了很久了,每次都是正向片段连接上后连接反向片段时正向片段不见了。这是为什么呢??谢谢!!!
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fuyin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-18 22:00:01
你连的多长的片段,你酶切的时候,是不是每次都是单酶切位点?...

大约750bp,就是每次都是两个不同的酶啊!
7楼2012-11-20 19:41:37
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

能不能说下你的具体构建过程啊?你的方法好像很特殊的样子
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-18 15:14:54
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

求构建过程真相。。。。
jiayoubashaonian
3楼2012-11-18 15:39:51
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fuyin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-18 15:14:54
能不能说下你的具体构建过程啊?你的方法好像很特殊的样子

先用两个酶来酶切载体一端,回收大片段后与所需片段连接。转化鉴定后,以连接了一个片段的干涉载体再做酶切,切去另外一端,胶回收后(此时已经有我连接的一个片段),再与所需片段连接,转化后鉴定时结果只有第二次连接的片段,第一次的没有了!
4楼2012-11-18 20:55:03
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