应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 干涉载体构建
91/1返回列表
查看: 2173  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fuyin

新虫 (初入文坛)

[求助] 干涉载体构建

为什么在构建干涉载体时总是连接上一边后另外一边掉了，我做了很久了，每次都是正向片段连接上后连接反向片段时正向片段不见了。这是为什么呢？？谢谢！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-11-17 22:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
能不能说下你的具体构建过程啊？你的方法好像很特殊的样子
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-18 15:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
求构建过程真相。。。。
回复此楼
jiayoubashaonian
3楼2012-11-18 15:39:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-18 15:14:54
能不能说下你的具体构建过程啊？你的方法好像很特殊的样子

先用两个酶来酶切载体一端，回收大片段后与所需片段连接。转化鉴定后，以连接了一个片段的干涉载体再做酶切，切去另外一端，胶回收后（此时已经有我连接的一个片段），再与所需片段连接，转化后鉴定时结果只有第二次连接的片段，第一次的没有了！
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-18 20:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-11-18 15:39:51
求构建过程真相。。。。

先用两个酶来酶切载体一端，回收大片段后与所需片段连接。转化鉴定后，以连接了一个片段的干涉载体再做酶切，切去另外一端，胶回收后（此时已经有我连接的一个片段），再与所需片段连接，转化后鉴定时结果只有第二次连接的片段，第一次的没有了！
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-18 20:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyin at 2012-11-18 20:56:13
先用两个酶来酶切载体一端，回收大片段后与所需片段连接。转化鉴定后，以连接了一个片段的干涉载体再做酶切，切去另外一端，胶回收后（此时已经有我连接的一个片段），再与所需片段连接，转化后鉴定时结果只有第二 ...

你连的多长的片段，你酶切的时候，是不是每次都是单酶切位点？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2012-11-18 22:00:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-18 22:00:01
你连的多长的片段，你酶切的时候，是不是每次都是单酶切位点？...

大约750bp，就是每次都是两个不同的酶啊！
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-20 19:41:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要是实验室不缺经费的话，推荐你用Gateway®LR Clonase II Enzyme Mix，这个试剂盒很方便，一步就将两个片段连上了。
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-20 20:31:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是整个发卡结构的臂太长了，导致质粒在复制过程中受到影响。
赞一下 回复此楼
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
9楼2012-11-21 01:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fuyin 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭