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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手求通过marker估计下dna浓度
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
fddyn: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-11-18 10:30:16
引用回帖:
8楼: Originally posted by fddyn at 2012-11-17 23:42:58
6ng/ul 这么低啊，是指粗提产物就6ng/ul吗，纯化后的测浓度是8ng/ul左右啊...

我是指纯化后的浓度，上样也是5ul的话。粗提浓度要高些，大概在25ng/ul左右吧。
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11楼2012-11-18 01:14:36
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fddyn: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢， 2012-11-18 10:30:53
将浓度高的样品等体积稀释，看条带亮度相类似的稀释倍数，应该是比较准确。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2012-11-18 10:24:15
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jl860822

金虫 (正式写手)
反相之后测一下灰度值就可以了，楼主这DNA提的很不错的，纯化的效果也不错，楼主是要构建DNA文库吗？
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13楼2012-11-19 12:04:05
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fddyn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-19 12:04:05
反相之后测一下灰度值就可以了，楼主这DNA提的很不错的，纯化的效果也不错，楼主是要构建DNA文库吗？

，谢谢夸奖
不做dna文库，就做微生物遗传多样性
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14楼2012-11-19 23:42:13
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375697868

新虫 (初入文坛)
你好！胶照相的里面有个浓度对比软件了，可以参考一下。另外，我看到你的Lambda DNA/Hind III Marker跑的比我的好的多，我想问下你胶浓度和电压分别是好多，跑了好长时间呢？非常感谢！
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15楼2013-10-14 13:13:16
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fddyn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 375697868 at 2013-10-14 13:13:16
你好！胶照相的里面有个浓度对比软件了，可以参考一下。另外，我看到你的Lambda DNA/Hind III Marker跑的比我的好的多，我想问下你胶浓度和电压分别是好多，跑了好长时间呢？非常感谢！

我们跑20kb的片段，一般用80v的电压，跑25min，胶浓度0.5-1%都试过，感觉差别不大，主要是后来要切胶纯化，0.5%的太软了不好切，又回1%的胶了
要是跑pcr的（300-500bp的，我们p的一般都这么大片段的），就110-120v的电压，20min，1%的胶
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16楼2013-10-15 18:44:31
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黑盖儿

铁虫 (小有名气)
条带浓度大约是Maker浓度的五分之一
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我给不了你宝马香车，锦衣玉食，但我会用一辈子去疼你，爱你，保护你
17楼2013-10-16 10:29:02
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