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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手求通过marker估计下dna浓度
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fddyn

金虫 (小有名气)

[求助] 新手求通过marker估计下dna浓度

用传统方法手提的土壤微生物dna，杂质含量太高测浓度的ND-1000分光光度计测出来不准，故想通过跑胶与marker比较估计个大概浓度，也好知道纯化的回收率，谢谢
Q1--Q5 均为qiagen胶回收试剂盒纯化后的样品，marker（M）在中间，1--8为粗提产物
样品上样量为 ：5ul
marker上样量为：5ul
marker用的是 Lambda DNA/Hind III Marker，上样6ul时 23130bp （最后那条）是238.4ng，9416bp（倒数第二条）是97.1ng

2012.11.09---.JPG
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1楼 2012-11-16 19:22:15
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jl860822

金虫 (正式写手)
反相之后测一下灰度值就可以了，楼主这DNA提的很不错的，纯化的效果也不错，楼主是要构建DNA文库吗？
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13楼2012-11-19 12:04:05
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fddyn

金虫 (小有名气)
再补充点，跑的是0.5%的琼脂糖胶
为什么纯化后比纯化前看上去片段大呐
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2楼2012-11-16 19:24:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fddyn: 金币+3, ★有帮助 2012-11-17 23:47:00
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-19 13:59:23
marker9kb与23kb的带跑得不是很开，而且浓度明显比样品高。可以考虑少上点marker，电泳时间长一点再看。从目前的粗略估计，大概浓度在大约6ng/ul。
纯化前的样品杂质多，浓度较高，条带笑脸，电泳的表观分子量稍微偏小是很正常的。
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3楼2012-11-17 08:00:16
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elbo

金虫 (小有名气)
貌似片段小于23kb，请问胶上面的标记是怎么弄的，谢谢。
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4楼2012-11-17 08:04:35
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