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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于用于q-PCR的RNA模板浓度测定
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leannele

金虫 (小有名气)

[交流] 关于用于q-PCR的RNA模板浓度测定 已有2人参与

本人是做植物病毒病的。最近用q-PCR检测样本中病毒的表达量。提取RNA后测定浓度，然后取1微克总RNA做反转录，然后做q-PCR。
    我的样本比较少，不能大量提取RNA，在RNA提出来后不可能用抽提法去除基因组DNA，只能使用公司的试剂盒。
    困惑的是我应该是在取出基因组DNA前测定RNA的浓度还是去除之后测定，或者是在其前后都测定？因为加入的DNA酶是要根据RNA的浓度来计算的。
还请各位帮忙
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1楼 2012-11-15 15:14:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最好是粗测一下提RNA浓度，根据这个做DNase消化，消化后再精确定浓度，反转录的RNA用量要根据消化过DNA的RNA浓度来做。
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3楼2012-11-16 09:23:51
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zhoulubin

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第一、建议你先跑电泳看看DNA残留情况，很多RNA提取试剂盒提不出DNA的；
第二、没必要纠结在上面时候测浓度，引物反转录说的1微克只是上限；
第三、如果你做Qpcr用的是dealt dealt Ct法，就没必要保证cDNA浓度一致，因为你有内参；
第四、如果是我，我会在反转录之后，再用cDNA跑个Act，电泳就知道大概各样品的浓度，好知道QPCR时稀释模板。
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2012-11-15 20:35:36
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