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xiaohong1213

银虫 (初入文坛)

[求助] 大唱杆菌JM109表达我的重组菌,无法表达怎么办

请问,我将含有tac启动子的重组菌转到大肠杆菌JM109中,测了很多次的SDS-PAGE就是看不到目的条带。是不是tac启动子在JM109中不能表达?还是我用IPTG诱导的温度37度不合适?或者更糟糕的说,是之前的构建有问题。但是自己反复想,就是想不出来那里出问题了。请大家帮忙想想办法哦!谢谢啦!
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xiaohong1213

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-16 13:45:13
如果确定你的载体及宿主都是能表达tac的话,那就只好换诱导条件了
另外不同的宿主诱导的效果不一样,所以也可以换不同的宿主试试。
如果实在都不行,就没办法了,蛋白表达也是很诡异的事情

嗯,我也是这么想的,今天改变条件再诱导一下,看看。谢谢各位的建议!
9楼2012-11-16 14:40:27
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-14 16:37:40
JM109是克隆宿主菌,表达蛋白的话应该用表达宿主菌,例如BL21,rosetter等,详细的可以自己百度一下。
另外你用的载体,是否适合表达,还是只是克隆载体,这些都有区别的。
你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2012-11-14 13:43:52
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
求助还搞那么多错别字,态度也忒那个啥了吧
另,这么业余的错误也能犯,也忒不认真了,好好学习2楼的指导吧
3楼2012-11-14 13:54:17
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xiaohong1213

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-14 13:43:52
JM109是克隆宿主菌,表达蛋白的话应该用表达宿主菌,例如BL21,rosetter等,详细的可以自己百度一下。
另外你用的载体,是否适合表达,还是只是克隆载体,这些都有区别的。

先谢谢你!关于这个问题,我也问过师兄,他说JM109可以表达连接tac启动子的重组菌。我选用了两种载体,PUC19和pEtac,不过都选用的启动子是tac启动子,现在的情况是,两种载体都没有表达。所以....不知道该怎么办了。
4楼2012-11-14 16:39:46
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