应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大唱杆菌JM109表达我的重组菌，无法表达怎么办
51/1返回列表
查看: 1382  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaohong1213

银虫 (初入文坛)

[求助] 大唱杆菌JM109表达我的重组菌，无法表达怎么办

请问，我将含有tac启动子的重组菌转到大肠杆菌JM109中，测了很多次的SDS-PAGE就是看不到目的条带。是不是tac启动子在JM109中不能表达？还是我用IPTG诱导的温度37度不合适？或者更糟糕的说，是之前的构建有问题。但是自己反复想，就是想不出来那里出问题了。请大家帮忙想想办法哦！谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-11-14 10:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

蛋白有胞内、胞外分泌的，你都看了吗？另，你加诱导了吗？如果这些都做了，还是没蛋白条带，建议你提RNA，反转录cDNA,然后以此为模板做PCR，看看有没有条带，即验证基因有没有转录。如果还没有，洗洗睡吧
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-16 13:27:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-14 16:37:40
JM109是克隆宿主菌，表达蛋白的话应该用表达宿主菌，例如BL21，rosetter等，详细的可以自己百度一下。
另外你用的载体，是否适合表达，还是只是克隆载体，这些都有区别的。
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2012-11-14 13:43:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
求助还搞那么多错别字，态度也忒那个啥了吧
另，这么业余的错误也能犯，也忒不认真了，好好学习2楼的指导吧
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-14 13:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaohong1213

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-14 13:43:52
JM109是克隆宿主菌，表达蛋白的话应该用表达宿主菌，例如BL21，rosetter等，详细的可以自己百度一下。
另外你用的载体，是否适合表达，还是只是克隆载体，这些都有区别的。

先谢谢你！关于这个问题，我也问过师兄，他说JM109可以表达连接tac启动子的重组菌。我选用了两种载体，PUC19和pEtac,不过都选用的启动子是tac启动子，现在的情况是，两种载体都没有表达。所以....不知道该怎么办了。
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-14 16:39:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭