24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1940  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 亲们,你们的包涵体蛋白透析会出现沉淀么,郁闷啊,能不能给只个招???

最近大量表达一种蛋白,蛋白表达量尚可,因为希望能够走工艺流程,所以蛋白的纯化出现问题,表达的蛋白在包涵体中,后期纯化是,8M尿素透析,然后选用PBS透析,但是蛋白总是沉淀,如何才能使得蛋白不沉淀呢,是不是只有加大尿素用量?但是到最后用PEG浓缩可以么?你们的包涵体都是怎么纯化的啊,有没有做这一方面的孩子啊,整天纯化蛋白,然后总是沉,郁闷啊,郁闷啊
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bclz at 2012-11-14 11:30:49
我之前也遇见过这种情况,后来分级透析,逐步在6M、4M、2M、1M透析2小时,然后PBS缓冲液里面透析过夜,几乎没有沉淀,楼主可以试试,不过可能和蛋白本身性质关系也很大,我也做过一个蛋白怎么透析都有沉淀的,但是沉 ...

嗯嗯,谢谢啦,我最近就用尿素透析的,没那么分好多步骤,直接8M尿素溶剂,然后2M 、0.5M透析,效果还不错,想用PBS再透析,但是发现蛋白还是会沉掉,所以就直接测浓度了,就没透析,跑出来的SDA-PAGE胶很干净的说。。。
3楼2012-11-21 10:39:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

bclz

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-21 17:29:21
sarah-miao: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-12-03 20:16:00
我之前也遇见过这种情况,后来分级透析,逐步在6M、4M、2M、1M透析2小时,然后PBS缓冲液里面透析过夜,几乎没有沉淀,楼主可以试试,不过可能和蛋白本身性质关系也很大,我也做过一个蛋白怎么透析都有沉淀的,但是沉淀里有目的蛋白,缓冲液也有,并且量还不错,就直接弃掉沉淀了。
2楼2012-11-14 11:30:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-21 17:29:36
不沉淀容易,保持一定的活性就很难。

可以试试看,用很浓的溶液(8M尿素)直接滴到大量buffer(100倍体积或者更大)里面,突然复性,这样浓度很低,不至于沉淀。

还可以试试,reduced reagent (MbE, 或者DTT)
行至水穷处,坐看云起时
4楼2012-11-21 15:29:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2012-11-21 15:29:38
不沉淀容易,保持一定的活性就很难。

可以试试看,用很浓的溶液(8M尿素)直接滴到大量buffer(100倍体积或者更大)里面,突然复性,这样浓度很低,不至于沉淀。

还可以试试,reduced reagent (MbE, 或者DTT)

额,貌似我忘记做western了,哎,回头再试着看下最后用0.5M尿素透析的有没有活性看看。。。谢谢啦
5楼2012-11-21 20:07:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上和省基金B类撒花 +6 花田半亩~白 2026-04-21 6/300 2026-04-22 10:55 by 3126142009
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[考研] 0854求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-15 28/1400 2026-04-22 09:54 by Sy199704!
[论文投稿] 急需审稿人!!! +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +7 随心所欲☆ 2026-04-15 8/400 2026-04-21 08:22 by Equinoxhua
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
请填处理意见