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sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 亲们,你们的包涵体蛋白透析会出现沉淀么,郁闷啊,能不能给只个招???

最近大量表达一种蛋白,蛋白表达量尚可,因为希望能够走工艺流程,所以蛋白的纯化出现问题,表达的蛋白在包涵体中,后期纯化是,8M尿素透析,然后选用PBS透析,但是蛋白总是沉淀,如何才能使得蛋白不沉淀呢,是不是只有加大尿素用量?但是到最后用PEG浓缩可以么?你们的包涵体都是怎么纯化的啊,有没有做这一方面的孩子啊,整天纯化蛋白,然后总是沉,郁闷啊,郁闷啊
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-21 17:29:36
不沉淀容易,保持一定的活性就很难。

可以试试看,用很浓的溶液(8M尿素)直接滴到大量buffer(100倍体积或者更大)里面,突然复性,这样浓度很低,不至于沉淀。

还可以试试,reduced reagent (MbE, 或者DTT)
行至水穷处,坐看云起时
4楼2012-11-21 15:29:38
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