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sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 亲们,你们做定点突变么?

最近在做定点突变,用的trans的定点突变的试剂盒,但是就是没有条带,我是希望在病毒基因组全场位置上突变两个碱基,有做过的人,能稍微知道下么,病毒基因组加上质粒载体一共12k,trans公司的人说可能是由于模板比较大的原因,你们做定点突变都是怎么做的,有什么经验能分享么,每次PCR都是P不出来,快郁闷死了。。。
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-14 16:37:11
我最近正在做全质粒定点突变,我的重组质粒是7kb,还是比较容易得到产物。
如果确定你是质粒太大的原因而不是PCR各种条件的因素,那么就换一种方法吧。貌似有种试剂盒是进行突变点区域小片段的置换进行突变的,可以搜搜。
彩云之南的愿望还能实现吗
7楼2012-11-12 19:48:15
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-13 16:48:08
哦哦,这样啊,我参考一楼的建议,准备现在T载体上做个突变,然后连接到目的载体上去呢,你用的哪家的定点突变的试剂盒啊?...

也是全式金的  FM111
彩云之南的愿望还能实现吗
14楼2012-11-14 12:08:47
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