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ddf273634096

新虫 (小有名气)

[求助] 跑荧光定量PCR,目的基因都是NA,内参基因均跑出来了,请问是怎么回事?

测的是水稻分蘖芽中的OSTB1,MOC1这2个目的基因,内参选的Actin。用的百乐的荧光定量机子。
第一次跑的OSTB1基因,CT值在28左右,同一重复内部三管的重复性还不错。
后面跑MOC1基因时,CT值是NA?请问是怎么回事?
引物均是来自文献。

OSTB1.jpg



MOC1.jpg
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
cDNA浓度太低,你最好控制CP值15-25之间,否则数据有效性影响较大。
4楼2012-11-11 11:07:25
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ddf273634096

新虫 (小有名气)

额,第二张图传错了,就是目标基因有的值是NA,请问怎么回事?
2楼2012-11-10 17:23:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是MOC1在你测的组织的生长条件下丰度低,可以尝试适当增加做qPCR时cDNA的用量。实在不行的话可以在做反转录的时候加入3’引物。
3楼2012-11-11 02:12:15
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-12 14:31:45
本身表达量太低。。。
还有,你确定下你的这个组织中确实表达这个基因吧。。。建议先做个普通PCR,看看表达不吧。。。
都不表达了,你这个差异也是没意义的了。或者,你可以找个表达这个基因的组织,做个对照,看看。
还有,引物没忘记加吧,,,,哈哈
5楼2012-11-11 11:14:42
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