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dongyan08

木虫 (正式写手)

[求助] 发酵纯化

本人一直以来都是做分子的,现在老板打算做蛋白纯化了,对这行太生了,所以请教各位大侠:
如果我要小规模的纯化蛋白一般用什么方法?我查了文献,很多是用亲和层析和分子筛、阴离子交换层析的方法,应该根据什么原则来选择方法呢?这些方法是有配套的平衡液吗?还是根据自己的蛋白性质来选择?
如果大规模的纯化,是不是应该用发酵罐发酵,发酵之后又得用什么方法纯化呢?疏水层析和阳离子交换层析?这都应该如何选择呢?有没有什么具体流程?
请各位熟悉这方面的大侠赐教!!万分感激!!!!
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

HIS-tag还是比较好弄的哈,特异性比较强,洗脱液不怎么复杂~只要楼主蛋白能够大量表达,不会沉淀不会形成包涵体,那就胜利一半了……
9楼2012-11-13 14:11:04
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匿名

用户注销 (知名作家)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
2楼2012-11-10 00:15:22
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有具体流程的,只能是自己摸索,要真的说流程,那就是粗提-细分。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-11-10 00:25:48
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fan127

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先把要的蛋白从发酵液里提到溶液溶解了,液体状态比较好去杂质.然后过滤,萃取,超滤纳滤,层析电泳等等,看文献吧.得有hplc作检测了.知道你要的东西的性质最好.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2012-11-10 16:49:37
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