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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵纯化
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dongyan08

木虫 (正式写手)

[求助] 发酵纯化

本人一直以来都是做分子的，现在老板打算做蛋白纯化了，对这行太生了，所以请教各位大侠：
如果我要小规模的纯化蛋白一般用什么方法？我查了文献，很多是用亲和层析和分子筛、阴离子交换层析的方法，应该根据什么原则来选择方法呢？这些方法是有配套的平衡液吗？还是根据自己的蛋白性质来选择？
如果大规模的纯化，是不是应该用发酵罐发酵，发酵之后又得用什么方法纯化呢？疏水层析和阳离子交换层析？这都应该如何选择呢？有没有什么具体流程？
请各位熟悉这方面的大侠赐教！！万分感激！！！！
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1楼 2012-11-09 21:29:12
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匿名

用户注销 (知名作家)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
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2楼2012-11-10 00:15:22
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有具体流程的，只能是自己摸索，要真的说流程，那就是粗提-细分。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-11-10 00:25:48
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fan127

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先把要的蛋白从发酵液里提到溶液溶解了,液体状态比较好去杂质.然后过滤,萃取,超滤纳滤,层析电泳等等,看文献吧.得有hplc作检测了.知道你要的东西的性质最好.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2012-11-10 16:49:37
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zjl01234

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

要分离纯化首先得摸清楚蛋白的一些性质吧，这样才好根据性质来设计路线，方法很多，也得适合你的蛋白
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5楼2012-11-12 23:22:33
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

工业生产当然要发酵的，一般都是发酵后浓缩，粗提，再做纯化，具体的操作要根据自己目标蛋白性质来确定
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6楼2012-11-13 08:33:14
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dongyan08

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zjl01234 at 2012-11-12 23:22:33
要分离纯化首先得摸清楚蛋白的一些性质吧，这样才好根据性质来设计路线，方法很多，也得适合你的蛋白

我要纯化的蛋白大小为78KD,带有HIS标签，亲水，我想用镍离子金属鳌合（Ni-NTA）亲和层析纯化，然后用子筛sephadex G-75凝胶层析，最后目的蛋白的离心超滤浓缩，这样设计可以吗？
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7楼2012-11-13 11:11:14
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魂断生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得如果是发酵的话，还要看你所要纯化的蛋白是胞外蛋白还是胞内蛋白，如果是胞内蛋白，还要先对细胞进行破壁将蛋白释放出来。据我了解，亲和层析特异性很强，一般用亲和层析洗脱下来后可以接着进行浓缩。许多都是指导性原则，纯化方案还是要经过实验摸索。
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8楼2012-11-13 11:38:19
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

HIS-tag还是比较好弄的哈，特异性比较强，洗脱液不怎么复杂~只要楼主蛋白能够大量表达，不会沉淀不会形成包涵体，那就胜利一半了……
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9楼2012-11-13 14:11:04
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seanzhu1996

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

His-tag的蛋白还是比较好纯化的，不过大规模发酵的时候工艺需要建立，和摇瓶的条件肯定不同。一般做的好的话，发酵罐上的产量会提高。剩下的分离提取就是常规化的流程了。
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享受每天的生活
10楼2012-11-21 13:28:38
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