应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵纯化
101/1返回列表
查看: 1253  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dongyan08

木虫 (正式写手)

[求助] 发酵纯化

本人一直以来都是做分子的，现在老板打算做蛋白纯化了，对这行太生了，所以请教各位大侠：
如果我要小规模的纯化蛋白一般用什么方法？我查了文献，很多是用亲和层析和分子筛、阴离子交换层析的方法，应该根据什么原则来选择方法呢？这些方法是有配套的平衡液吗？还是根据自己的蛋白性质来选择？
如果大规模的纯化，是不是应该用发酵罐发酵，发酵之后又得用什么方法纯化呢？疏水层析和阳离子交换层析？这都应该如何选择呢？有没有什么具体流程？
请各位熟悉这方面的大侠赐教！！万分感激！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2012-11-09 21:29:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (知名作家)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2012-11-10 00:15:22
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有具体流程的，只能是自己摸索，要真的说流程，那就是粗提-细分。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-11-10 00:25:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fan127

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先把要的蛋白从发酵液里提到溶液溶解了,液体状态比较好去杂质.然后过滤,萃取,超滤纳滤,层析电泳等等,看文献吧.得有hplc作检测了.知道你要的东西的性质最好.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-10 16:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjl01234

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

要分离纯化首先得摸清楚蛋白的一些性质吧，这样才好根据性质来设计路线，方法很多，也得适合你的蛋白
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-12 23:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

工业生产当然要发酵的，一般都是发酵后浓缩，粗提，再做纯化，具体的操作要根据自己目标蛋白性质来确定
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-13 08:33:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongyan08

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zjl01234 at 2012-11-12 23:22:33
要分离纯化首先得摸清楚蛋白的一些性质吧，这样才好根据性质来设计路线，方法很多，也得适合你的蛋白

我要纯化的蛋白大小为78KD,带有HIS标签，亲水，我想用镍离子金属鳌合（Ni-NTA）亲和层析纯化，然后用子筛sephadex G-75凝胶层析，最后目的蛋白的离心超滤浓缩，这样设计可以吗？
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-13 11:11:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魂断生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得如果是发酵的话，还要看你所要纯化的蛋白是胞外蛋白还是胞内蛋白，如果是胞内蛋白，还要先对细胞进行破壁将蛋白释放出来。据我了解，亲和层析特异性很强，一般用亲和层析洗脱下来后可以接着进行浓缩。许多都是指导性原则，纯化方案还是要经过实验摸索。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-11-13 11:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

HIS-tag还是比较好弄的哈，特异性比较强，洗脱液不怎么复杂~只要楼主蛋白能够大量表达，不会沉淀不会形成包涵体，那就胜利一半了……
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-11-13 14:11:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seanzhu1996

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

His-tag的蛋白还是比较好纯化的，不过大规模发酵的时候工艺需要建立，和摇瓶的条件肯定不同。一般做的好的话，发酵罐上的产量会提高。剩下的分离提取就是常规化的流程了。
赞一下 回复此楼
享受每天的生活
10楼2012-11-21 13:28:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dongyan08 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +13 rare12345 2026-03-18 13/650 2026-03-19 17:30 by jean5056
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by ！本暗一次！
[考研] 307求调剂 +6 冷笙123 2026-03-17 6/300 2026-03-19 15:14 by peike
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 0817调剂 +3 没有答案_ 2026-03-14 3/150 2026-03-19 09:51 by Xu de nuo
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 mxcz321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭