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dongyan08

木虫 (正式写手)

[求助] 发酵纯化

本人一直以来都是做分子的,现在老板打算做蛋白纯化了,对这行太生了,所以请教各位大侠:
如果我要小规模的纯化蛋白一般用什么方法?我查了文献,很多是用亲和层析和分子筛、阴离子交换层析的方法,应该根据什么原则来选择方法呢?这些方法是有配套的平衡液吗?还是根据自己的蛋白性质来选择?
如果大规模的纯化,是不是应该用发酵罐发酵,发酵之后又得用什么方法纯化呢?疏水层析和阳离子交换层析?这都应该如何选择呢?有没有什么具体流程?
请各位熟悉这方面的大侠赐教!!万分感激!!!!
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魂断生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得如果是发酵的话,还要看你所要纯化的蛋白是胞外蛋白还是胞内蛋白,如果是胞内蛋白,还要先对细胞进行破壁将蛋白释放出来。据我了解,亲和层析特异性很强,一般用亲和层析洗脱下来后可以接着进行浓缩。许多都是指导性原则,纯化方案还是要经过实验摸索。
8楼2012-11-13 11:38:19
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