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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何失活耐高温酶
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jessenju

木虫 (正式写手)

[求助] 如何失活耐高温酶

最近想用耐高温酶比如Tag ligase， Taq polymerase之类的在60度反应，但是反应后想失活，不知道有什么好的办法没有。单纯的加热到95度貌似不能失活，因为做PCRde时候Taq polymerase就是加热到了95度，请各位帮帮忙，谢谢。
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1楼 2012-11-08 11:49:11
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屿iland

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jessenju: 金币+5, ★有帮助, 谢谢帮助 2012-11-08 13:34:38
加热不能失活就用其他的方法，比如加有机溶剂，加重金属

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-11-08 11:53:12
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jessenju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 屿iland at 2012-11-08 11:53:12
加热不能失活就用其他的方法，比如加有机溶剂，加重金属

除了有机溶剂或者重金属呢，我不想引入太多的别的东西
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3楼2012-11-08 13:35:15
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jessenju: 金币+5, ★有帮助 2012-11-08 18:15:22
可以试试加盐离子，调pH值啊之类的方法呗~或者用柱子纯化去除蛋白……
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4楼2012-11-08 14:26:25
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jessenju: 金币+4, ★有帮助 2012-11-08 18:17:33
一般如果是金属离子依赖的酶，你可以尝试加一下EDTA，但是就是不知道会不会对你后续试验有影响。。。。。
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5楼2012-11-08 15:08:31
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屿iland

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
jessenju: 金币+5, ★有帮助, 谢谢帮助 2012-11-08 18:17:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by jessenju at 2012-11-08 13:35:15
除了有机溶剂或者重金属呢，我不想引入太多的别的东西...

我觉得过柱子太费时间了，要不你你先用有机溶剂使酶变性以后，再用减压蒸馏法把有机溶剂蒸出来～～～～推荐先用浓乙醇试一下～～～～注意选沸点低一点的溶剂

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2012-11-08 15:28:06
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jessenju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-08 14:26:25
可以试试加盐离子，调pH值啊之类的方法呗~或者用柱子纯化去除蛋白……

用什么柱子呢， 像Taq polymerase里面还有DNA呢，怎么分啊
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7楼2012-11-08 18:16:30
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jessenju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-11-08 15:08:31
一般如果是金属离子依赖的酶，你可以尝试加一下EDTA，但是就是不知道会不会对你后续试验有影响。。。。。

看了一下用的酶里面的buffer就有EDTA
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8楼2012-11-08 18:17:26
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
jessenju: 金币+5, ★有帮助 2012-11-09 16:28:06
引用回帖:
7楼: Originally posted by jessenju at 2012-11-08 18:16:30
用什么柱子呢， 像Taq polymerase里面还有DNA呢，怎么分啊
...

有商业化的PCR回收试剂盒啊……这种东西专门去除体系里面的酶啊离子啊什么的东西，但是能够保留DNA产物……
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9楼2012-11-09 08:15:29
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-09 14:17:12
jessenju: 金币+6 2012-11-09 16:29:12
不知道你后续试验是想做什么的。加入EDTA，因为缓冲液里含有EDTA但浓度不至于让酶失活。只知道DnaseI等酶的失活都是加EDTA，但对后面的实验其实没有太大的影响，如果是想回收里面的DNA，用无水乙醇沉淀纯化一下就可以了。连试剂盒都省了
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你的日子如何，你的力量也必如何！
10楼2012-11-09 09:52:58
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