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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么用玻璃珠破碎酵母，请指教
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475502411

铜虫 (著名写手)

[求助] 怎么用玻璃珠破碎酵母，请指教

最近做毕赤酵母的表达，但是遇到提取目的蛋白的问题，用蜗牛酶和超声的效果都不好，买了玻璃珠，但目前不知道怎么处理玻璃珠，怎么用？
希望各位大侠指教
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
1楼 2012-11-07 14:28:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dazey

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-11-08 13:54:11
取适量菌液，离心留菌体
加入500微升的裂解缓冲液
然后等体积的加入玻璃珠
漩涡30s,冰浴30s,10次左右就差不多了...

你好！
我需要酵母的次生代谢物，请问不加入裂解液行不行？
使用玻璃珠+超声能否破碎细胞？
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10楼2013-05-06 11:04:02
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普通回帖

yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
475502411: 金币+6 2012-11-08 12:58:57
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-08 13:51:17
你只买玻璃珠的话，是想手动磨粉吗？
你最好也买了玻璃珠破碎仪，那样就简单多了。玻璃珠体积点2/3-3/4,酵母悬浮液占其余部分，破1min,停2-3min，多破几个循环就可以了。
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2楼2012-11-07 14:48:30
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
475502411: 金币+4 2012-11-08 12:59:01
是滴，用玻璃破碎仪就可以了
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3楼2012-11-07 17:19:08
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-07 14:48:30
你只买玻璃珠的话，是想手动磨粉吗？
你最好也买了玻璃珠破碎仪，那样就简单多了。玻璃珠体积点2/3-3/4,酵母悬浮液占其余部分，破1min,停2-3min，多破几个循环就可以了。

没有，我是想用斡旋仪，我们实验室没有专门的玻璃珠破碎仪，看有人说斡旋1min，冰浴1min，重复20次，2860g离心就行了
不知道可以吗？
玻璃珠的量怎样加？
我买的是0.5的玻璃珠
还不知道怎么用
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4楼2012-11-08 12:58:34
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 475502411 at 2012-11-08 12:58:34
没有，我是想用斡旋仪，我们实验室没有专门的玻璃珠破碎仪，看有人说斡旋1min，冰浴1min，重复20次，2860g离心就行了
不知道可以吗？
玻璃珠的量怎样加？
我买的是0.5的玻璃珠
还不知道怎么用...

取适量菌液，离心留菌体
加入500微升的裂解缓冲液
然后等体积的加入玻璃珠
漩涡30s,冰浴30s,10次左右就差不多了
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475502411
5楼2012-11-08 13:54:11
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475502411

铜虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-11-08 13:54:11
取适量菌液，离心留菌体
加入500微升的裂解缓冲液
然后等体积的加入玻璃珠
漩涡30s,冰浴30s,10次左右就差不多了...

玻璃珠的体积怎么算啊，我是大量的，有1g的菌体，我加5ml的裂解液和0.5g的玻璃珠，涡旋1min，冰浴1min，2200rpm离心收集上清备用，行吗？
谢谢
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6楼2012-11-08 15:55:13
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flyde1234

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，去看看invtrigen酵母的说明书，上面有提到怎么破碎酵母，
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我相信
7楼2012-11-09 09:45:09
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-09 14:19:16
475502411: 金币+5 2012-11-12 11:10:12
475502411: 金币+5 2013-01-06 13:26:17
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-11-08 13:54:11
取适量菌液，离心留菌体
加入500微升的裂解缓冲液
然后等体积的加入玻璃珠
漩涡30s,冰浴30s,10次左右就差不多了...

同意，直接漩涡振荡器就可以了。振荡30s，冰浴30s。效果很好。我一直都这样做。关于循环次数依据你的需要而定。如果只是为了跑蛋白看有没有表达，可以20-30次。如果为了比较或定量，次数多保险一些。可以做60个循环。
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8楼2012-11-09 10:50:59
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by reallpf at 2012-11-09 10:50:59
同意，直接漩涡振荡器就可以了。振荡30s，冰浴30s。效果很好。我一直都这样做。关于循环次数依据你的需要而定。如果只是为了跑蛋白看有没有表达，可以20-30次。如果为了比较或定量，次数多保险一些。可以做60个循环 ...

谢谢，这个方法很好，我比较了几种破碎方法，这个最好，我是震荡1min，冰浴1min
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
9楼2013-01-06 13:27:06
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