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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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xiaozengzeng

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR跑电泳只出现marker,附图 哪位大侠分析下原因啊

检测APP/PS1转基因小鼠阴阳性,条带只出现marker,引物母液APP-F15.8皮摩尔每微升,APP-R 15.8皮摩尔每微升,PS1-F 15.9皮摩尔每微升,PS1-R17.8皮摩尔每微升.

八个样品体系,                                             
水         115.2微升
buffer   16微升
DNTPS   8微升
taq         0.8微升
DMSO     8微升
APP-F    6.329微升
APP-R    6.329微升
PS1-F    6.289微升
PS1-R    5.618微升
电泳30分钟,120V。
2012-11-6.jpg
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choukeitou

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.gel 浓度过高。
2.genome DNA 的状态不是很好
3.没有 positive control
4.DMSO 的添加也不是必须的。
5.band 有点 smera.

建议用现在的primer,用转基因的小鼠的plasmid DNA 做为positive control, 找到适宜的Tm.
9楼2012-11-11 08:00:20
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查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-11-11 08:41:36
你的模板GC含量很高吗?一般用不着加DMSO的。即使加,一般终浓度为3%,你的感大概有5%吧。还有,感觉你的胶上marker也不怎么亮啊,是不是EB跑没了?
2楼2012-11-07 08:18:03
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-11-11 08:41:45
胶图不亮啊,跑胶时间比较长,如果非得跑这么长时间,可以先跑胶,跑完再用染料泡胶。
能模糊地看到一些弥散,应该还是你的PCR基本不工作,如果引物之前可以用,那建议修改一下PCR体系,比如按ls说的,干脆去掉DMSO,调整一下Tm
3楼2012-11-07 09:11:19
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xiaozengzeng

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-07 08:18:03
你的模板GC含量很高吗?一般用不着加DMSO的。即使加,一般终浓度为3%,你的感大概有5%吧。还有,感觉你的胶上marker也不怎么亮啊,是不是EB跑没了?

EB是电泳跑完了 再染的。
APP-F 5’-GACTGACCACTCGACCAGGTTCTG-3’
APP-R 5’-CTTGTAAGTTGGATTCTCATATCC-3’
PS1-F         5’-AAT AGA GAA CGG CAG GAG CA-3’
PS1-R 5’-GCC  ATG  AGG  GCA CTA ATC AT-3’
4楼2012-11-08 08:40:00
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