应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR跑电泳只出现marker,附图 哪位大侠分析下原因啊
51/1返回列表
查看: 3032  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaozengzeng

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR跑电泳只出现marker,附图 哪位大侠分析下原因啊

检测APP/PS1转基因小鼠阴阳性，条带只出现marker,引物母液APP-F15.8皮摩尔每微升，APP-R 15.8皮摩尔每微升,PS1-F 15.9皮摩尔每微升，PS1-R17.8皮摩尔每微升.

八个样品体系，                                             
水         115.2微升
buffer   16微升
DNTPS   8微升
taq         0.8微升
DMSO     8微升
APP-F    6.329微升
APP-R    6.329微升
PS1-F    6.289微升
PS1-R    5.618微升
电泳30分钟，120V。
2012-11-6.jpg
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 2012.11.6.bmp
    • 2012-11-06 17:55:33, 438.28 K
  • 附件 2 : 2012.11.6.tif
    • 2012-11-06 17:55:37, 437.7 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-06 18:09:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

choukeitou

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.gel 浓度过高。
2.genome DNA 的状态不是很好
3.没有 positive control
4.DMSO 的添加也不是必须的。
5.band 有点 smera.

建议用现在的primer，用转基因的小鼠的plasmid DNA 做为positive control, 找到适宜的Tm.
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-11 08:00:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-11-11 08:41:36
你的模板GC含量很高吗？一般用不着加DMSO的。即使加，一般终浓度为3%，你的感大概有5%吧。还有，感觉你的胶上marker也不怎么亮啊，是不是EB跑没了？
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-07 08:18:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-11-11 08:41:45
胶图不亮啊，跑胶时间比较长，如果非得跑这么长时间，可以先跑胶，跑完再用染料泡胶。
能模糊地看到一些弥散，应该还是你的PCR基本不工作，如果引物之前可以用，那建议修改一下PCR体系，比如按ls说的，干脆去掉DMSO，调整一下Tm
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-07 09:11:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozengzeng

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-07 08:18:03
你的模板GC含量很高吗？一般用不着加DMSO的。即使加，一般终浓度为3%，你的感大概有5%吧。还有，感觉你的胶上marker也不怎么亮啊，是不是EB跑没了？

EB是电泳跑完了 再染的。
APP-F 5’-GACTGACCACTCGACCAGGTTCTG-3’
APP-R 5’-CTTGTAAGTTGGATTCTCATATCC-3’
PS1-F         5’-AAT AGA GAA CGG CAG GAG CA-3’
PS1-R 5’-GCC  ATG  AGG  GCA CTA ATC AT-3’
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-08 08:40:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:40 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭