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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR跑电泳只出现marker,附图 哪位大侠分析下原因啊
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xiaozengzeng

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR跑电泳只出现marker,附图 哪位大侠分析下原因啊

检测APP/PS1转基因小鼠阴阳性，条带只出现marker,引物母液APP-F15.8皮摩尔每微升，APP-R 15.8皮摩尔每微升,PS1-F 15.9皮摩尔每微升，PS1-R17.8皮摩尔每微升.

八个样品体系，                                             
水         115.2微升
buffer   16微升
DNTPS   8微升
taq         0.8微升
DMSO     8微升
APP-F    6.329微升
APP-R    6.329微升
PS1-F    6.289微升
PS1-R    5.618微升
电泳30分钟，120V。
2012-11-6.jpg
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1楼 2012-11-06 18:09:14
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-11-11 08:41:45
胶图不亮啊，跑胶时间比较长，如果非得跑这么长时间，可以先跑胶，跑完再用染料泡胶。
能模糊地看到一些弥散，应该还是你的PCR基本不工作，如果引物之前可以用，那建议修改一下PCR体系，比如按ls说的，干脆去掉DMSO，调整一下Tm
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3楼2012-11-07 09:11:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-11-11 08:41:36
你的模板GC含量很高吗？一般用不着加DMSO的。即使加，一般终浓度为3%，你的感大概有5%吧。还有，感觉你的胶上marker也不怎么亮啊，是不是EB跑没了？
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2楼2012-11-07 08:18:03
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xiaozengzeng

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-07 08:18:03
你的模板GC含量很高吗？一般用不着加DMSO的。即使加，一般终浓度为3%，你的感大概有5%吧。还有，感觉你的胶上marker也不怎么亮啊，是不是EB跑没了？

EB是电泳跑完了 再染的。
APP-F 5’-GACTGACCACTCGACCAGGTTCTG-3’
APP-R 5’-CTTGTAAGTTGGATTCTCATATCC-3’
PS1-F         5’-AAT AGA GAA CGG CAG GAG CA-3’
PS1-R 5’-GCC  ATG  AGG  GCA CTA ATC AT-3’
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4楼2012-11-08 08:40:00
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zjykysm

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-11-11 08:41:54
虽然跑得不亮，但是还是很明显没有目的条带，还是PCR的原因，体系和退火条件再优化试试
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5楼2012-11-09 19:00:40
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