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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因串联表达
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761429495

新虫 (小有名气)

[交流] 基因串联表达

同志们：
我想把两个基因串联起来表达，克隆的时候这两个基因的引物该如何设计呢，或者还有什么方法可以把这两个基因串联起来，有知道的童鞋指导指导啊
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1楼 2012-11-06 09:43:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhlf1989513

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
761429495(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-06 17:24:34
1、在第一个基因末端和第二个基因的前端加入相同的酶切位点，克隆后酶切再连接。
2、可以设计两对引物。第一段基因的下游引物多出大概多出20个碱基左右，第二段基因的上游引物也多出大概20个碱基左右，这两个“20个碱基”互补。当然这样的话最终连接后会多出来20个碱基对。
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761429495
2楼2012-11-06 10:12:16
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普通回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以设计酶切位点连接，但应该注意到ORF 不要移码，也可以融合PCR融合到一块
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761429495
3楼2012-11-06 10:21:21
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761429495

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-06 10:12:16
1、在第一个基因末端和第二个基因的前端加入相同的酶切位点，克隆后酶切再连接。
2、可以设计两对引物。第一段基因的下游引物多出大概多出20个碱基左右，第二段基因的上游引物也多出大概20个碱基左右，这两个“20个 ...

那引物设计时第二个基因的前20多bp碱基应该加在第一个基因的终止密码子TAA的前面是后面啊？第一个基因的后20多bp个碱基加在第二个基因的ATG前面还是后面啊？ 因为我的两个基因都有启动子和终止子，我有点晕了
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4楼2012-11-06 10:45:18
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761429495

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-11-06 10:21:21
可以设计酶切位点连接，但应该注意到ORF 不要移码，也可以融合PCR融合到一块

设计酶切位点可以直接连接在一起吗
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5楼2012-11-06 11:02:33
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
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我觉得直接连接基因不是串联表达吧，只是融合蛋白。应该两个基因分别由自己的启动子再连接起来
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6楼2012-11-06 13:04:11
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接用错位pcr就可以达到楼主想要的效果吧，至于表达，这个真的不知道哎
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7楼2012-11-06 13:48:59
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 761429495 at 2012-11-06 10:45:18
那引物设计时第二个基因的前20多bp碱基应该加在第一个基因的终止密码子TAA的前面是后面啊？第一个基因的后20多bp个碱基加在第二个基因的ATG前面还是后面啊？ 因为我的两个基因都有启动子和终止子，我有点晕了:tuzi ...

楼主，你是构建融合蛋白吗？还是怎么的？
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8楼2012-11-06 13:56:22
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-06 13:56:22
楼主，你是构建融合蛋白吗？还是怎么的？...

就是把编码一个蛋白的两个基因融合在一起，然后在毕赤酵母中表达的
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9楼2012-11-06 14:21:59
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 761429495 at 2012-11-06 14:21:59
就是把编码一个蛋白的两个基因融合在一起，然后在毕赤酵母中表达的...

干嘛要把编码一个蛋白的两个基因融合在一起呢？一般不都是融合表达不同蛋白的基因吗？
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10楼2012-11-06 19:12:01
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 761429495 at 2012-11-06 11:02:33
设计酶切位点可以直接连接在一起吗...

是的，三段一起连接或者两个连接后沉淀，再与第三个连接
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11楼2012-11-07 09:58:03
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101202139

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有专门做共表达基因的表达载体，pET-Duet-1，是属于pET系列，你可以去查查！
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12楼2012-11-07 10:16:11
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
SOE-PCR
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13楼2012-11-07 11:10:35
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by 101202139 at 2012-11-07 10:16:11
有专门做共表达基因的表达载体，pET-Duet-1，是属于pET系列，你可以去查查！

你那里有菌株吗？能否交换》？？
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14楼2013-07-10 23:39:13
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-06 10:12:16
1、在第一个基因末端和第二个基因的前端加入相同的酶切位点，克隆后酶切再连接。
2、可以设计两对引物。第一段基因的下游引物多出大概多出20个碱基左右，第二段基因的上游引物也多出大概20个碱基左右，这两个“20个 ...

能否将这20个碱基对视为连接肽LINKER进行设计？？
楼主有无做过相关内容，怎么将连接肽加入进两个基因间
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15楼2013-07-10 23:40:38
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