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761429495

新虫 (小有名气)


[交流] 基因串联表达

同志们:
我想把两个基因串联起来表达,克隆的时候这两个基因的引物该如何设计呢,或者还有什么方法可以把这两个基因串联起来,有知道的童鞋指导指导啊
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 761429495 at 2012-11-06 14:21:59
就是把编码一个蛋白的两个基因融合在一起,然后在毕赤酵母中表达的...

干嘛要把编码一个蛋白的两个基因融合在一起呢?一般不都是融合表达不同蛋白的基因吗?
10楼2012-11-06 19:12:01
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
761429495(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-06 17:24:34
1、在第一个基因末端和第二个基因的前端加入相同的酶切位点,克隆后酶切再连接。
2、可以设计两对引物。第一段基因的下游引物多出大概多出20个碱基左右,第二段基因的上游引物也多出大概20个碱基左右,这两个“20个碱基”互补。当然这样的话最终连接后会多出来20个碱基对。

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2楼2012-11-06 10:12:16
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以设计酶切位点连接,但应该注意到ORF 不要移码,也可以融合PCR融合到一块

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3楼2012-11-06 10:21:21
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761429495

新虫 (小有名气)


送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-06 10:12:16
1、在第一个基因末端和第二个基因的前端加入相同的酶切位点,克隆后酶切再连接。
2、可以设计两对引物。第一段基因的下游引物多出大概多出20个碱基左右,第二段基因的上游引物也多出大概20个碱基左右,这两个“20个 ...

那引物设计时第二个基因的前20多bp碱基应该加在第一个基因的终止密码子TAA的前面是后面啊?第一个基因的后20多bp个碱基加在第二个基因的ATG前面还是后面啊? 因为我的两个基因都有启动子和终止子,我有点晕了
4楼2012-11-06 10:45:18
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