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体外转录
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大家好，我最近在做体外转录的时候遇到一个问题！我所需要转录的目的片段是插入到pcDNA3.0这个载体中的EcoRI这个酶切位点中，片段长度为2146bp, 我用BglII和XhoI这两个酶分别进行线性化，然后T7转录酶(fermentas)进行转录，但是无法转录得到正确大小的片段，电泳图显示转录之后的RNA条带的大小在marker500 bp的位置以下，无论是跑变性胶还是跑非变性胶都是这个结果！我尝试增加T7聚合酶的量，以及延长转录时间，转录过夜，都没有效果。但是我同时在做的另外一个片段（约500 bp），转录可以得到正确大小的条带。 请有经验的同志们分析一下可能的原因！ 图.png |
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