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细胞凋亡实验,请教消化问题,欢迎大家前来指导
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2011加油
银虫
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(幼儿园)
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虫号: 1210848
[交流]
细胞凋亡实验,请教消化问题,欢迎大家前来指导
大家好,我最近头一回做了凋亡实验,可能是消化(不含EDTA胰酶)没有掌握好,导致溶剂对照组中出现较多的早期凋亡细胞(30%多的比例),收集前显微镜下观察该组细胞时,没有太多细胞出现脱落,从得到结果分析,有可能是消化过度了,造成假阳性结果。我铺板是6孔板,请问大家每孔加入多少胰酶,是否是看到细胞变圆未脱落前,就开始终止消化,这样的效果会较好吗???请战友们多多指导,求下回实验顺利!谢谢大家
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1楼
2012-11-01 09:27:15
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dumbooo
新虫
(初入文坛)
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虫号: 3955583
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我认为首先要根据细胞而定,需要摸索细胞的特性,即使是贴壁细胞,也有贴壁性强弱之分,通常是消化至有少数细胞开始脱落便可终止消化然后进行吹打,6孔板的话,我认为500ul左右应该可以了,只要能覆盖细胞就够了,另外如果细胞本身状态不是很好,比如传了很多代以后,可能也容易效果不好,综合来讲,我认为主要还是摸清细胞特性。
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25楼
2015-07-19 21:44:50
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jiangyinshen
木虫
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★ ★
2011加油(金币+1): 谢谢参与
2011加油: 金币+1, 谢谢交流,我只加了每孔0.5毫升,它都容易过度了哦
2012-11-01 11:30:15
六孔板加1ml胰酶足矣,消化不要超过5min,否则对细胞不好
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2楼
2012-11-01 09:56:48
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piaoyingaza
木虫
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★ ★
2011加油(金币+1): 谢谢参与
2011加油: 金币+1, 谢谢顶贴,1毫升有可能还是多了哦
2012-11-01 11:30:42
引用回帖:
2楼
:
Originally posted by
jiangyinshen
at 2012-11-01 09:56:48
六孔板加1ml胰酶足矣,消化不要超过5min,否则对细胞不好
受教了
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3楼
2012-11-01 09:57:25
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银虫
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★ ★
2011加油(金币+1): 谢谢参与
2011加油: 金币+1, 谢谢交流,你一般每孔加多少胰酶哦,请不吝赐教,急盼再回复,哈哈
2012-11-01 11:33:36
"细胞变圆未脱落前,就开始终止消化"这是必须的
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6楼
2012-11-01 10:50:45
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