[交流] 细胞凋亡实验，请教消化问题，欢迎大家前来指导

大家好，我最近头一回做了凋亡实验，可能是消化（不含EDTA胰酶）没有掌握好，导致溶剂对照组中出现较多的早期凋亡细胞（30%多的比例），收集前显微镜下观察该组细胞时，没有太多细胞出现脱落，从得到结果分析，有可能是消化过度了，造成假阳性结果。我铺板是6孔板，请问大家每孔加入多少胰酶，是否是看到细胞变圆未脱落前，就开始终止消化，这样的效果会较好吗？？？请战友们多多指导，求下回实验顺利！谢谢大家

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1楼2012-11-01 09:27:15

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2011加油

银虫 (正式写手)

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引用回帖:

17楼: Originally posted by hallen6891 at 2012-11-29 15:57:32
早期凋亡应该用ANNEXIS IV检测的哈，除去消化问题不说，我想知道你做流式的时候，Gates是怎么圈定的，早期凋亡的话细胞膜完整度还是比较好的，但是还是会变小，皱缩，同时内部颗粒物质增多，复杂程度增加，也就是FS ...

我使用南京凯基的Annexin-v FITC和PI的凋亡试剂盒检测，我遇到的问题是，消化掌握的不是太好，可能造成假阳性出现，溶剂组和阴性对照组在显微镜下观察时，情况差不多，给药组的细胞出现细胞抑制挺明显的。但做出来的结果是，溶剂组的早期凋亡好高比例，有时甚至高过给药组中的最大剂量组，所以觉得自己操作不当。
我把阴性对照组（不加药）细胞分成三等分，划门时，我是用一个一份不加任何染料的阴性对照组先上机，再用另外两份单染的阴性对照组上机。