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承诺的眷湖

新虫 (初入文坛)

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专业: 免疫学研究新技术与新方法

[求助] CTAB法提取乳酸菌DNA后电泳图有多条带事怎么回事？

本人用CTAB法提取乳酸菌DNA，marker右边的5个泳道是加了溶菌酶处理的菌株，为何后面会有条带？做16S是否有影响？
具体步骤如下：
（1）每个离心管加1500ul培养物
（2）将上述装有培养物的离心管放入离心机离心5分钟（8000转/s）
（3）弃上清，再加1500ul培养物，混匀，放入离心机离心5分钟（8000转/s）
（4）弃上清，加1mLTE缓冲液与沉淀物充分混匀，离心5分钟(达到洗涤细菌沉淀物的目的)
（5）弃上清，取567ulTE缓冲液置各有细菌沉淀物的小管，盖上盖子后放到震荡机上进行震荡或用移液枪吸推将其混匀
（6）加30ul10％SDS
（7）加3ul20mol/L蛋白酶K，轻轻颠倒混匀
（8）放入37℃烘箱1h
（9）加入100ul5mol/L的NaCL溶液，盖上盖子轻轻混匀
（10）加入80ulCTAB NaCL溶液，盖上盖子轻轻混匀
（11）65℃水浴10分钟
（12）加入800ul酚/氯仿/异戊醇，轻轻混匀（去除蛋白质和其他大分子物质）
（13）12000转/s离心5分钟
（14）取上清液（上层为蛋白质，下层为苯酚）放入对应的新的离心管
（15）再次加入500ul/L酚/氯仿/异戊醇溶液
（16）再次离心5分钟
注：若15步的离心界面层的蛋白质很少且分层较明显，可省略17、18两步
（17）用移液枪取出500ul左右的上清液置对应的新的离心管，加2倍体积的无水乙醇和1/10的3mol/L NaAC
（18）离心，将DNA沉淀到小管底部
（19）倒去上清液，只留底部DNA沉淀，向各管加500ul70％乙醇（洗涤DNA）
（20）12000转/s离心5分钟
（21）弃上清液，晾干，重溶于30ul的TE缓冲液
（22）加入1ulRNA酶，37℃消化1小时
（23）DNA样品在-20℃保存备用
marker（3000）右边5个泳道在第6步前加入10微升10mg/mL的溶菌酶，希望各位大侠帮忙解释下，或者提供该方法不足之处，谢谢！

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