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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 若回收胶，跑电泳应加多少样品
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xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 若回收胶，跑电泳应加多少样品

我想通过跑电泳得到目的基因的条带，再回收胶，那每孔应加多少pcr产物呢（大孔）？；loadingbuffer加多少
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1楼 2012-10-26 11:51:28
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hj890509

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-28 17:52:44
孔不同加样量也不同，大孔有30ul和50ul的，我们做的时候50ul样品中加了10ulbuffer
点样量为30ul
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2楼2012-10-26 12:00:10
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杰-米尼

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也是新手。现在每次回收我都是每个孔加80ulPCR产物，loadingbuffer相应多加一些就是了
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做科研还是需要好的逻辑能力的 加油
3楼2012-10-26 12:00:13
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就是30ul左右，你的样品可以全加的啊
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
4楼2012-10-26 12:16:33
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xulu2008

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hj890509 at 2012-10-26 12:00:10
孔不同加样量也不同，大孔有30ul和50ul的，我们做的时候50ul样品中加了10ulbuffer
点样量为30ul

那一般胶配多厚呢
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5楼2012-10-26 12:21:20
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by xulu2008 at 2012-10-26 12:21:20
那一般胶配多厚呢...

我一般配30ul，0.8%的胶，中等孔径大小梳子，8个孔，每个孔50ul样品.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-10-26 14:40:25
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review

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
50ul  loading加 5ul    全都点进去的（大孔）
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交流
7楼2012-10-26 16:03:09
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木小默

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我都是尽可能的多加，因为要回收，样加的多的话回收的产物浓度比较高，有利于后续实验！
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8楼2012-10-28 15:07:19
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木小默

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我都是尽可能的多加，因为要回收，样加的多的话回收的产物浓度比较高，有利于后续实验！
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9楼2012-10-28 15:07:40
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-10-28 17:53:28
个人意见，仅供参考！
1.上样量的多少视乎你PCR产物的浓度，和点样孔的承载能力；
2.loading buffer的使用量要看两点：首先，你用的loading buffer是几X的，正确的使用方法应该是loading buffer的终浓度为1X的；
3.建议使用6X的buffer，本人之前用10X的出现过一条大约1500bp的条带，但胶回收什么都没有，问过他们公司的技术部门才知道，那个条带是buffer里面的一些东西和PCR体系中的某些东西发生反应产生的假条带。
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10楼2012-10-28 15:54:38
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