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xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 若回收胶,跑电泳应加多少样品

我想通过跑电泳得到目的基因的条带,再回收胶,那每孔应加多少pcr产物呢(大孔)?;loadingbuffer加多少
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-10-28 17:53:28
个人意见,仅供参考!
1.上样量的多少视乎你PCR产物的浓度,和点样孔的承载能力;
2.loading buffer的使用量要看两点:首先,你用的loading buffer是几X的,正确的使用方法应该是loading buffer的终浓度为1X的;
3.建议使用6X的buffer,本人之前用10X的出现过一条大约1500bp的条带,但胶回收什么都没有,问过他们公司的技术部门才知道,那个条带是buffer里面的一些东西和PCR体系中的某些东西发生反应产生的假条带。
10楼2012-10-28 15:54:38
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hj890509

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-28 17:52:44
孔不同加样量也不同,大孔有30ul和50ul的,我们做的时候50ul样品中加了10ulbuffer
点样量为30ul
2楼2012-10-26 12:00:10
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杰-米尼

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也是新手。现在每次回收我都是每个孔加80ulPCR产物,loadingbuffer相应多加一些就是了
做科研还是需要好的逻辑能力的 加油
3楼2012-10-26 12:00:13
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
就是30ul左右,你的样品可以全加的啊
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
4楼2012-10-26 12:16:33
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