应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 在PCR仪中，从95度均匀降温到25度，怎么弄才能90s降温1度？
271/1返回列表
查看: 7636  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

[交流] 在PCR仪中，从95度均匀降温到25度，怎么弄才能90s降温1度？

最近，我要自己合成接头，接头的序列都知道，也从公司合成了单链，现在要把接头的两条单链通过退火来合成双链的。从网上看到碧云天的退火buffer，都说挺好使的，就买了。仔细阅读说明书后，才发现，里面有一个均匀退火的步骤，不好弄。是这样说的，每8s降温0.1度，如果PCR仪不具备这种功能的话，也可以90s降温1度。我从我们使用的PCR仪（ABI 2720）上，怎么弄都弄不好。从别的实验室找PCR仪，找到的能设置降温速度的，但是他们那里设置的*.*℃/s，看这格式，最慢的速度是0,1度每秒，而我要求的是0.01度每秒。又打算使用多不保温步骤来设置，90s降温1度，需要70步，但是PCR仪上最多六个HOLD 步骤。崩溃。。。。。。。
求助各位大仙们，有什么好的办法吗？
注：我从网上看到把水烧开，放到室内，把要退火的体系放进去，让开水自然冷却，之后就能使用。这个方法很不错的。但是我们老师听到这个方法后就直接给我回绝了。想想，开水自然冷却，开始的时候降温快，随后降温速度慢，整体降温不均匀，可能会影响实验。但是 ，在退火过程中，降温的快慢又有什么影响呢？在普通PCR过程中，退火时的降温速率很快的，引物同样能结合到模板上，而均匀降温又是何解？大仙们，给个答案吧！please！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-10-25 10:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

494750284

木虫 (小有名气)
★
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
问过试剂盒的技术人员了吗，可能没有那么严格的要求，如果有的话看看他们是如何实现的。

[ Last edited by 494750284 on 2012-10-25 at 12:20 ]
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-25 12:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)
★
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
还是咨询技服人员吧，个人认为没必要那么严格。
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-25 14:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huxx

金虫 (小有名气)
★
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
不需要那么严谨.  引物溶解后, 混一下, 加入PCR BUFFER. 至1X.     90s 冷却下来还是10min冷却下来都可以.    开水缓慢降温也可以.  水多冷却慢, 水少冷却快. 看着办.  那么短很容易结合的.
赞一下 回复此楼
16楼2012-10-25 15:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-26 13:38:55
本帖仅楼主可见
赞一下
22楼2012-10-25 18:06:12
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

分子菜鸟

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用touch down的程序改改是不是可以
赞一下 回复此楼
23楼2012-10-26 10:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aloon111

金虫 (正式写手)
有点难度
回复此楼
24楼2012-10-26 10:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

尚慕寒

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把水烧开，放到室内，把要退火的体系放进去，让开水自然冷却，之后就能使用。
这个方法是可以用的，类似实验我做过很多次了，把装开水的烧杯放到可以保温的环境（比如泡沫盒或关闭电源的培养箱），效果更好。
祝好
赞一下 回复此楼
25楼2012-10-27 20:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

尚慕寒

铜虫 (初入文坛)
另外特别要小心EP管不要漏水，最好用封口膜缠上
赞一下 回复此楼
26楼2012-10-27 20:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沐风512

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用touchdown这个程序，每个循环降1度，共70循环，每个循环90s。△T为-1度
赞一下 回复此楼
27楼2018-09-26 15:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
blackdogzmz4楼
2012-10-25 14:48   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
fuhanmei5楼
2012-10-25 15:03   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
wasxnbe6楼
2012-10-25 15:09   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
liushuyan7楼
2012-10-25 15:10   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
liufudong8楼
2012-10-25 15:20   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
jiandanai339楼
2012-10-25 15:26   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
yahoo345110楼
2012-10-25 15:40   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
lanse784111楼
2012-10-25 15:45   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
wuyun12312楼
2012-10-25 15:48   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
男的糊涂11113楼
2012-10-25 15:50   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
liang888714楼
2012-10-25 15:53   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
空悲切的娃15楼
2012-10-25 15:53   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
woai82017楼
2012-10-25 15:58   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
太阳345218楼
2012-10-25 16:00   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
梦想可能19楼
2012-10-25 16:03   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
chenghu20楼
2012-10-25 16:11   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
but水货21楼
2012-10-25 16:14   回复  
dafeizizhu(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 dafeizizhu 的主题更新
271/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭