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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 琼脂扩散法的操作规程
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂扩散法的操作规程

我手头有一个操作规程，但不是很详细。
琼脂扩散法测定抗菌药物的抗菌活性，需要在培养平板铺两层琼脂培养基，下层起到支撑的作用，上层是将菌液混入，有没有朋友将步骤说得详细一点。
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1楼 2012-10-23 11:07:12
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-10-24 15:23:52
有专门做琼脂扩散法的平板，平板底部很平的，不用考虑培养基平不平的问题。
是需要先用液体培养基培养E.coli，并且定量OD值，这要根据检测准确度确定E.coli的加量。

嗯，这个我知道，非常感谢。
我现在的问题是，测定OD之后，将菌液调到多大的菌浓度？然后又以怎么样的比例加入到55度未融化的固体培养基？
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11楼2012-10-24 15:44:30
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:06:04
我们一般做的时候是每块平板单独配制培养基（Φ90的平板25ml左右，琼脂的加量为0.75％），培养基灭好菌后，放到50度恒温水浴锅内降到50度，加入一定量的指示菌，混匀后倒平板，培养基凝固后用6mm的打孔器的打孔，将标样和检测的样品分别加入到不同的孔内（约50-100ul），低温扩散2-4小时或更多的时间，正放培养箱内培养，根据抑菌圈的直径计算活力或含量。
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2楼2012-10-23 14:45:24
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aloon111

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:06:12
风中的羽翼_: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-24 11:01:21
打孔法，纸片法，牛津杯法，也算是琼脂扩散法。你要哪种？
下层培养基目的是让上层培养基底部平整，减少误差，因为有些培养皿底部不平，导致培养基厚度不一致。
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汇天下之贤
3楼2012-10-23 16:54:25
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-23 16:54:25
打孔法，纸片法，牛津杯法，也算是琼脂扩散法。你要哪种？
下层培养基目的是让上层培养基底部平整，减少误差，因为有些培养皿底部不平，导致培养基厚度不一致。

我要用牛津杯法。我想先在培养基下面铺一层，然后上层培养基混入菌液。菌种是大肠杆菌，不知道用2楼的方法在50℃会不会死？
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4楼2012-10-24 08:59:06
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