应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 琼脂扩散法的操作规程
131/2返回列表12下一页
查看: 2576  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂扩散法的操作规程

我手头有一个操作规程，但不是很详细。
琼脂扩散法测定抗菌药物的抗菌活性，需要在培养平板铺两层琼脂培养基，下层起到支撑的作用，上层是将菌液混入，有没有朋友将步骤说得详细一点。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

天然产物化学

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-23 11:07:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:06:04
我们一般做的时候是每块平板单独配制培养基（Φ90的平板25ml左右，琼脂的加量为0.75％），培养基灭好菌后，放到50度恒温水浴锅内降到50度，加入一定量的指示菌，混匀后倒平板，培养基凝固后用6mm的打孔器的打孔，将标样和检测的样品分别加入到不同的孔内（约50-100ul），低温扩散2-4小时或更多的时间，正放培养箱内培养，根据抑菌圈的直径计算活力或含量。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-10-23 14:45:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wgy2007

木虫 (小有名气)
用大肠杆菌做指示菌我没有做过，我们现在用的指示菌是滕黄微球菌，OD（600nm，稀释10倍）在0.4左右，指示菌的加量150-200ul/每平板。每次检测活力之前先把指示菌做好，用甘油管保藏起来，可以用3-5个月，用之前先做实验，用标样检测，根据抑菌圈的直径大小，边缘的清晰度来确定指示菌的加量。你可以在网上查一下这两个文献《琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化》、《管碟法测定Nisin效价》，或许对你有帮助。
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2012-10-25 16:52:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

aloon111

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:06:12
风中的羽翼_: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-24 11:01:21
打孔法，纸片法，牛津杯法，也算是琼脂扩散法。你要哪种？
下层培养基目的是让上层培养基底部平整，减少误差，因为有些培养皿底部不平，导致培养基厚度不一致。
赞一下 回复此楼
汇天下之贤
3楼2012-10-23 16:54:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-23 16:54:25
打孔法，纸片法，牛津杯法，也算是琼脂扩散法。你要哪种？
下层培养基目的是让上层培养基底部平整，减少误差，因为有些培养皿底部不平，导致培养基厚度不一致。

我要用牛津杯法。我想先在培养基下面铺一层，然后上层培养基混入菌液。菌种是大肠杆菌，不知道用2楼的方法在50℃会不会死？
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-24 08:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-10-23 14:45:24
我们一般做的时候是每块平板单独配制培养基（Φ90的平板25ml左右，琼脂的加量为0.75％），培养基灭好菌后，放到50度恒温水浴锅内降到50度，加入一定量的指示菌，混匀后倒平板，培养基凝固后用6mm的打孔器的打孔，将 ...

谢谢你的回复，我要用牛津杯做，所以下面会铺一层培养基，然后上层用你那个方法做。我想问一下，我用的是大肠杆菌，那我是不是需要先用液体培养基培养E.coli，并且定量OD值？然后加入到50度恒温的固定培养基然后倒板。这样对不对？
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-24 09:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aloon111

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 风中的羽翼_ at 2012-10-24 08:59:06
我要用牛津杯法。我想先在培养基下面铺一层，然后上层培养基混入菌液。菌种是大肠杆菌，不知道用2楼的方法在50℃会不会死？...

不会死，你担心这个的话，可以把菌量加大。一般是没问题的。培养基不烫手的时候就可以加菌了。
赞一下 回复此楼
汇天下之贤
6楼2012-10-24 09:38:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-24 09:38:59
不会死，你担心这个的话，可以把菌量加大。一般是没问题的。培养基不烫手的时候就可以加菌了。...

非常感谢。最后问您一个问题，如果用LB培养基，上层培养基是不是需要加葡萄糖？
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-24 09:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aloon111

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 风中的羽翼_ at 2012-10-24 09:50:20
非常感谢。最后问您一个问题，如果用LB培养基，上层培养基是不是需要加葡萄糖？...

不用，大肠能长好。
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

风中的羽翼_
汇天下之贤
8楼2012-10-24 09:51:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-24 09:51:53
不用，大肠能长好。...

非常感谢
回复此楼
9楼2012-10-24 11:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wgy2007

木虫 (小有名气)
有专门做琼脂扩散法的平板，平板底部很平的，不用考虑培养基平不平的问题。
是需要先用液体培养基培养E.coli，并且定量OD值，这要根据检测准确度确定E.coli的加量。
赞一下 回复此楼
10楼2012-10-24 15:23:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 风中的羽翼_ 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +7 苏东坡二世 2026-08-23 7/350 2026-08-27 18:14 by 瞬息宇宙
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭