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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 琼脂扩散法的操作规程
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂扩散法的操作规程

我手头有一个操作规程，但不是很详细。
琼脂扩散法测定抗菌药物的抗菌活性，需要在培养平板铺两层琼脂培养基，下层起到支撑的作用，上层是将菌液混入，有没有朋友将步骤说得详细一点。
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1楼2012-10-23 11:07:12
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:06:04
我们一般做的时候是每块平板单独配制培养基（Φ90的平板25ml左右，琼脂的加量为0.75％），培养基灭好菌后，放到50度恒温水浴锅内降到50度，加入一定量的指示菌，混匀后倒平板，培养基凝固后用6mm的打孔器的打孔，将标样和检测的样品分别加入到不同的孔内（约50-100ul），低温扩散2-4小时或更多的时间，正放培养箱内培养，根据抑菌圈的直径计算活力或含量。
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2楼2012-10-23 14:45:24
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wgy2007

木虫 (小有名气)
有专门做琼脂扩散法的平板，平板底部很平的，不用考虑培养基平不平的问题。
是需要先用液体培养基培养E.coli，并且定量OD值，这要根据检测准确度确定E.coli的加量。
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10楼2012-10-24 15:23:52
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wgy2007

木虫 (小有名气)
用大肠杆菌做指示菌我没有做过，我们现在用的指示菌是滕黄微球菌，OD（600nm，稀释10倍）在0.4左右，指示菌的加量150-200ul/每平板。每次检测活力之前先把指示菌做好，用甘油管保藏起来，可以用3-5个月，用之前先做实验，用标样检测，根据抑菌圈的直径大小，边缘的清晰度来确定指示菌的加量。你可以在网上查一下这两个文献《琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化》、《管碟法测定Nisin效价》，或许对你有帮助。
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12楼2012-10-25 16:52:04
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