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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂扩散法的操作规程

我手头有一个操作规程,但不是很详细。
琼脂扩散法测定抗菌药物的抗菌活性,需要在培养平板铺两层琼脂培养基,下层起到支撑的作用,上层是将菌液混入,有没有朋友将步骤说得详细一点。
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wgy2007

木虫 (小有名气)

用大肠杆菌做指示菌我没有做过,我们现在用的指示菌是滕黄微球菌,OD(600nm,稀释10倍)在0.4左右,指示菌的加量150-200ul/每平板。每次检测活力之前先把指示菌做好,用甘油管保藏起来,可以用3-5个月,用之前先做实验,用标样检测,根据抑菌圈的直径大小,边缘的清晰度来确定指示菌的加量。你可以在网上查一下这两个文献《琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化》、《管碟法测定Nisin效价》,或许对你有帮助。
12楼2012-10-25 16:52:04
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:06:04
我们一般做的时候是每块平板单独配制培养基(Φ90的平板25ml左右,琼脂的加量为0.75%),培养基灭好菌后,放到50度恒温水浴锅内降到50度,加入一定量的指示菌,混匀后倒平板,培养基凝固后用6mm的打孔器的打孔,将标样和检测的样品分别加入到不同的孔内(约50-100ul),低温扩散2-4小时或更多的时间,正放培养箱内培养,根据抑菌圈的直径计算活力或含量。
2楼2012-10-23 14:45:24
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aloon111

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:06:12
风中的羽翼_: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-24 11:01:21
打孔法,纸片法,牛津杯法,也算是琼脂扩散法。你要哪种?
下层培养基目的是让上层培养基底部平整,减少误差,因为有些培养皿底部不平,导致培养基厚度不一致。
汇天下之贤
3楼2012-10-23 16:54:25
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-23 16:54:25
打孔法,纸片法,牛津杯法,也算是琼脂扩散法。你要哪种?
下层培养基目的是让上层培养基底部平整,减少误差,因为有些培养皿底部不平,导致培养基厚度不一致。

我要用牛津杯法。我想先在培养基下面铺一层,然后上层培养基混入菌液。菌种是大肠杆菌,不知道用2楼的方法在50℃会不会死?
4楼2012-10-24 08:59:06
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