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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂扩散法的操作规程

我手头有一个操作规程,但不是很详细。
琼脂扩散法测定抗菌药物的抗菌活性,需要在培养平板铺两层琼脂培养基,下层起到支撑的作用,上层是将菌液混入,有没有朋友将步骤说得详细一点。
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-23 16:54:25
打孔法,纸片法,牛津杯法,也算是琼脂扩散法。你要哪种?
下层培养基目的是让上层培养基底部平整,减少误差,因为有些培养皿底部不平,导致培养基厚度不一致。

我要用牛津杯法。我想先在培养基下面铺一层,然后上层培养基混入菌液。菌种是大肠杆菌,不知道用2楼的方法在50℃会不会死?
4楼2012-10-24 08:59:06
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-10-23 14:45:24
我们一般做的时候是每块平板单独配制培养基(Φ90的平板25ml左右,琼脂的加量为0.75%),培养基灭好菌后,放到50度恒温水浴锅内降到50度,加入一定量的指示菌,混匀后倒平板,培养基凝固后用6mm的打孔器的打孔,将 ...

谢谢你的回复,我要用牛津杯做,所以下面会铺一层培养基,然后上层用你那个方法做。我想问一下,我用的是大肠杆菌,那我是不是需要先用液体培养基培养E.coli,并且定量OD值?然后加入到50度恒温的固定培养基然后倒板。这样对不对?
5楼2012-10-24 09:02:27
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-24 09:38:59
不会死,你担心这个的话,可以把菌量加大。一般是没问题的。培养基不烫手的时候就可以加菌了。...

非常感谢。最后问您一个问题,如果用LB培养基,上层培养基是不是需要加葡萄糖?
7楼2012-10-24 09:50:20
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
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8楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-24 09:51:53
不用,大肠能长好。...

非常感谢
9楼2012-10-24 11:02:41
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-10-24 15:23:52
有专门做琼脂扩散法的平板,平板底部很平的,不用考虑培养基平不平的问题。
是需要先用液体培养基培养E.coli,并且定量OD值,这要根据检测准确度确定E.coli的加量。

嗯,这个我知道,非常感谢。
我现在的问题是,测定OD之后,将菌液调到多大的菌浓度?然后又以怎么样的比例加入到55度未融化的固体培养基?
11楼2012-10-24 15:44:30
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