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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » G-250蛋白染色液的配制
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)

[求助] G-250蛋白染色液的配制

G-250蛋白染色液：考马斯亮蓝G-250 100mg溶于 50ml 95%乙醇，加入 100ml 85%磷酸，用蒸馏水稀释到1000ml。
请教下这里的85%磷酸是买的，还是用固体磷酸配制的呢？
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1楼 2012-10-22 19:05:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
尚轩舞雪: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢，学习了，我直接订购85％的磷酸。 2012-10-23 09:02:48
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-29 15:56:52
常见市售磷酸的浓度就是85%，拿那个配就可以了。如果不是特殊需要，一般实验室不会用到更纯的磷酸了。
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2楼2012-10-23 08:42:17
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
尚轩舞雪: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-10-23 09:04:44
实验室有AR磷酸的话直接稀释，只有固体的话自己配也行。
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彩云之南的愿望还能实现吗
3楼2012-10-23 08:44:04
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by timmychina at 2012-10-23 08:44:04
实验室有AR磷酸的话直接稀释，只有固体的话自己配也行。

固体的话用质量分数w/v，还用灭菌或过滤处理吗？按市售85％磷酸来说也是浓酸了。
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4楼2012-10-23 09:06:49
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 尚轩舞雪 at 2012-10-23 09:06:49
固体的话用质量分数w/v，还用灭菌或过滤处理吗？按市售85％磷酸来说也是浓酸了。...

我们用G250都是染PAGE胶的，没有必要进行灭菌处理。
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彩云之南的愿望还能实现吗
5楼2012-10-23 09:39:09
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by timmychina at 2012-10-23 09:39:09
我们用G250都是染PAGE胶的，没有必要进行灭菌处理。...

我也是用来做染色液的，作蛋白标准曲线，学习了，谢谢
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6楼2012-10-23 10:58:27
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-29 15:57:08
不好意思 上一条回答错了  Commassie brilliant blue G250是用来定量蛋白的    Commassie brilliant blueR250是用于染胶的   配制时两者都不需要灭菌

1.10mg G-250
2.95%乙醇5ml
3.85%磷酸10ml
4.去离子水定容至100ml
5.4℃棕色瓶保存
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彩云之南的愿望还能实现吗
7楼2012-10-23 13:41:57
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by timmychina at 2012-10-23 13:41:57
不好意思 上一条回答错了  Commassie brilliant blue G250是用来定量蛋白的    Commassie brilliant blueR250是用于染胶的   配制时两者都不需要灭菌

1.10mg G-250
2.95%乙醇5ml
3.85%磷酸10ml
4.去离子水定 ...

我配的考马斯亮蓝在加入到检测蛋白中会出现悬浮的颗粒，是怎么回事啊，标准曲线一直做不好，请教下。
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8楼2012-10-25 10:53:06
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 尚轩舞雪 at 2012-10-25 10:53:06
我配的考马斯亮蓝在加入到检测蛋白中会出现悬浮的颗粒，是怎么回事啊，标准曲线一直做不好，请教下。...

充分溶解后如果还有颗粒的话，放置几个小时使其沉积，用的时候吸取容器上部的无悬浮液体。这个标准曲线没什么技术含量，相关系数差不多在0.990以上就可以。或者可以使用酶标仪或者BCA法定蛋白。
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彩云之南的愿望还能实现吗
9楼2012-10-25 15:58:30
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by timmychina at 2012-10-25 15:58:30
充分溶解后如果还有颗粒的话，放置几个小时使其沉积，用的时候吸取容器上部的无悬浮液体。这个标准曲线没什么技术含量，相关系数差不多在0.990以上就可以。或者可以使用酶标仪或者BCA法定蛋白。...

多谢啦，曲线做出来了，相关系数0.993
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10楼2012-10-28 20:11:53
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