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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关疏水层析的问题
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
看天: 金币+4, 鼓励交流 和分享 2012-10-30 16:10:02
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhangyehong at 2012-10-24 19:55:46
怎么知道蛋白有没有辅酶或辅基啊？  有颜色是因为之前过离子柱的时候有活性的成分都有颜色 所以就认为我要的酶也有颜色。...

把你氢氧化钠洗脱的东西，用考马斯亮蓝检测下，看看是不是蛋白。或者把你离子交换，疏水，氢氧化钠洗脱的东西放一起跑个电泳。这样你就知道你最后的东西是什么。水洗脱不下来，乙醇洗脱不下来，只能用氢氧化钠处理柱子的，亲和力要多强，我认为不是蛋白分子，是个小分子，你蛋白的颜色估计就是这个小分子的颜色。他是什么颜色的？
弱的疏水柱我觉得没效果，不同的疏水柱只是洗脱时的盐浓度不一样，要是水能洗脱下来，你倒是可以换。只有氢氧化钠洗脱的，换了没意义。
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zhangyehong
11楼2012-10-25 10:18:08
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zhangyehong

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by ynkuaile at 2012-10-25 10:18:08
把你氢氧化钠洗脱的东西，用考马斯亮蓝检测下，看看是不是蛋白。或者把你离子交换，疏水，氢氧化钠洗脱的东西放一起跑个电泳。这样你就知道你最后的东西是什么。水洗脱不下来，乙醇洗脱不下来，只能用氢氧化钠处理 ...

样品是棕色的，我试试看，谢谢了。
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12楼2012-10-26 09:32:26
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dannyboy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-10-30 16:10:10
建议你增加点有机溶剂或者1-2M的尿素作为洗脱促进剂。
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13楼2012-10-29 09:00:15
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zhangyehong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by dannyboy at 2012-10-29 09:00:15
建议你增加点有机溶剂或者1-2M的尿素作为洗脱促进剂。

我也正在这方面想 ，但是不知道有机溶剂会不会失活？
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14楼2012-10-30 15:28:17
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yitonghui

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得还是你疏水填料选择的问题，原来我做的时候，我是把丁基、苯基、辛基等几种都试一下，感觉你的蛋白是挂的太结实了
；换丁基疏水试试，我倒觉得不能直接用水洗，蛋白在纯水中性质难以保证，特别是浓度高点时容易析出，另外中性ph值也不一定适合你蛋白。
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15楼2012-10-30 21:27:43
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落满夏天

银虫 (正式写手)
换弱一点的柱子试试呢？
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星星之火，可以燎原
16楼2012-10-31 09:02:07
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dannyboy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

低浓度的有机溶剂不会失活的！
低浓度的尿素也不会失活
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17楼2012-11-01 08:28:36
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dannyboy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

假如说硫酸铵导致蛋白质结合的太牢了，可以换成氯化钠，也可以换疏水层析的填料。
一般在pH中性，偏酸或偏碱都能影响蛋白质的结合力。
也就是说可以改变pH在偏酸或偏碱条件下结合蛋白。
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18楼2012-11-01 16:04:57
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zhangyehong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 落满夏天 at 2012-10-31 09:02:07
换弱一点的柱子试试呢？

实验室只有苯基琼脂糖凝胶的预装柱
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19楼2012-11-05 23:27:51
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