24小时热门版块排行榜    

查看: 1287  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 请问pET30b这个载体在IPTG诱导后有没有可能表达除了目的蛋白以外的其他蛋白?

用pET30b表达一个蛋白,诱导前后有很明显的蛋白表达条带。但是做Western做了三次了,都没有特异性条带,而且蛋白在37度诱导条件下竟然完全在可溶组分里面,所以我很怀疑是不是我的目的蛋白。但是除了118KD的半乳糖苷酶以外,PET系统应该不会表达除了目的蛋白以外的其他蛋白了吧?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-22 00:31:24
没遇到过这种情况。37度诱导可溶也不一定有问题,是否可溶和蛋白有关。
首先确定表达载体做得没问题。诱导的蛋白分子量对不对?能用标签纯化出来吗?此外,你可以做一个空载体诱导前和诱导后的对照,看看有没有非特 ...

这个蛋白是我从一个大蛋白上截短的一段,本来在整个蛋白当中,这一段是强疏水性部分,不知道单独截出来以后会发生什么变化,除了等电点和可溶性,还应该用哪些手段来表征它的性质呢?感谢你一直关注我的帖子
4楼2012-10-22 09:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shenxing325: 金币+3, 有帮助 2012-10-22 09:57:57
没遇到过这种情况。37度诱导可溶也不一定有问题,是否可溶和蛋白有关。
首先确定表达载体做得没问题。诱导的蛋白分子量对不对?能用标签纯化出来吗?此外,你可以做一个空载体诱导前和诱导后的对照,看看有没有非特异诱导。
2楼2012-10-22 00:31:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shenxing325: 金币+2, 有帮助 2012-10-22 09:59:33
首先,这种表达情况是正常的。
其次,如果怀疑,可以做一些简单的测试,最重要的就是活性。
小兵一个
3楼2012-10-22 09:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by linxt2005 at 2012-10-22 09:04:06
首先,这种表达情况是正常的。
其次,如果怀疑,可以做一些简单的测试,最重要的就是活性。

我这个不是酶,没有活性,只能先试试看能不能纯化出来了。但是Western都挂不上的话,亲和柱能挂上吗??
5楼2012-10-22 09:59:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 请问三个字的中文名字,在文中到底怎么表示? 5+3 zhongyuan764 2024-06-22 7/350 2024-06-27 11:28 by f1yfish
[基金申请] 博后面上今天下午会公布吗?大家有无消息? +10 地理学1995 2024-06-24 14/700 2024-06-27 11:24 by jackiddd
[论文投稿] 我在写关于多维空间的论文,希望能与大家交流,准备在science上发表 +9 lgf519 2024-06-24 11/550 2024-06-27 11:20 by f1yfish
[基金申请] 博后网上办公系统维护 +14 取名字烦人 2024-06-25 22/1100 2024-06-26 22:15 by tuanbao2023
[有机交流] 做什么表征可以检测塑料中碳氢氧的含量 5+3 pzr的sci之路 2024-06-25 7/350 2024-06-26 19:32 by wrgeng
[找工作] 老博士选高校 5+5 woodhead8386 2024-06-24 8/400 2024-06-26 16:35 by 大大熊呀
[硕博家园] 博士该不该读? +8 L1009225316 2024-06-25 8/400 2024-06-26 16:26 by huixiong0627
[基金申请] 要持续整治滥发“帽子”、“牌子”之风 +6 babu2015 2024-06-25 6/300 2024-06-26 14:52 by felicity6056
[硕博家园] 【45岁以上博士】柔性人才引进项目,有补贴 +9 Dreamsummit 2024-06-24 18/900 2024-06-26 12:28 by hujm159
[基金申请] 今天能不能出来名单 +8 地理学1995 2024-06-25 10/500 2024-06-26 09:46 by msjy
[基金申请] 这样的说辞是上会了吗 +12 学员d3zYCz 2024-06-24 15/750 2024-06-25 22:05 by 3115321
[考博] 没读上博,好焦虑! +6 wangzhe_bs 2024-06-24 8/400 2024-06-25 21:15 by wangzhe_bs
[基金申请] 博后面上到底什么时候出结果??? +7 爱学lsy 2024-06-24 7/350 2024-06-25 19:24 by 暴走的蒜泥
[基金申请] 2024安徽省哲社立项名单公示 +3 robin_work 2024-06-24 6/300 2024-06-25 14:37 by Pickfoot
[有机交流] 高温酯化反应喷料 20+4 hl24678 2024-06-21 7/350 2024-06-25 09:45 by ghj-hebust
[考博] 申请25博士,可以提前进组做科研助理 +6 逐梦途中w 2024-06-22 8/400 2024-06-24 21:49 by keyaner23
[基金申请] 说博后基金7月出的真打电话了吗? +12 antonysole 2024-06-24 14/700 2024-06-24 13:39 by sizhouyi
[基金申请] 国自然青年基金,1A4B能上会吗?青年和面上的上会标准是一样的吗? +19 今晚推荐22 2024-06-20 32/1600 2024-06-23 23:17 by andywei1028
[论文投稿] OSA期刊审稿逾期 +3 Thomas_Squid 2024-06-22 3/150 2024-06-23 15:20 by wspglt
[基金申请] 工材口青年基金大概什么样能上会? +15 今晚推荐22 2024-06-20 21/1050 2024-06-22 23:04 by qbn0326
信息提示
请填处理意见