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昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 求助-4Kb的基因P不出来

有一个4Kb的基因,我需要把它P出来然后够载体,用cDNA二链为模板,混合酶、rTaq、LA Taq、pfu等酶都试过了,退火温度也做过梯度,还有,分成两段进行拼接的方法也用过,都是P不出来。请各位大虾指点一二,不甚感激!!

[ Last edited by 1949stone on 2012-10-23 at 07:50 ]
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昺昺

木虫 (小有名气)

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22楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 22:38:47
最好使的高保真酶是东洋纺的,其次是TAKARA的。长片段用高保真酶来扩。东洋纺公司的酶最好。逆转录酶也是。你可以试试。同学用TAKARA的Primesatar扩的,也是4kb,先没扩出来,后延长了延伸时间,就OK了

你好!我也用过Primesatar,你扩增4Kb的时候,延伸时间是多少啊?
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25楼2012-10-20 09:17:39
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昺昺

木虫 (小有名气)

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30楼: Originally posted by 木左左 at 2012-10-21 21:47:31
麻烦问一下,这个cDNA第二链合成什么原理啊?有必要合成第二链吗?...

我担心cDNA一链会不会浓度太低,就合成第二链试试
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31楼2012-10-22 19:44:14
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昺昺

木虫 (小有名气)

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32楼: Originally posted by ilyzp at 2012-10-23 15:45:13
也有可能是酶的原因,可以试试东洋纺的KOD酶,你可以上网看看它的主页,主页上有对这个酶的例子的介绍都有,有很长的片段都可以P出来,我们实验室用的很长的片段都很好,你也可以试试

好的,多谢!我试试。
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33楼2012-10-23 20:31:56
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木虫 (小有名气)

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8楼: Originally posted by 植物园园长 at 2012-10-18 16:15:57
天根最近出来一款快速的高保真酶Fast HiFi酶,扩增能力超强,建议试试。

你好!我是用了一下天根的高保真酶,也是不好,请问你们当时是怎么调整程序的啊
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34楼2012-11-01 16:02:19
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