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zhangby2002

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by czcpudai at 2012-10-16 18:52:28
谢谢!cDNA跑电泳怎么样检测其完整性?没听说过cDNA还要跑电泳的啊?电泳显示什么效果才说明cDNA是好的呢???
还有我想问一下,您的逆转录的试剂盒是哪家公司的??谢谢!...

反转好的cDNA用内参去P,如果出现内参条带,证明你反转结果很好。
业精于勤,荒于嬉;行成于思,毁于随。
11楼2012-10-16 18:59:41
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zhangby2002 at 2012-10-16 18:59:41
反转好的cDNA用内参去P,如果出现内参条带,证明你反转结果很好。...

恩 ,您说的是有道理的,可是现在连内参都没有哎,我觉得我RNA应该是没有问题,都提取了那么多了,一开始也总是认为RNA不好,但是测完OD比值和跑完电泳后,我觉得不是RNA问题了,可能问题就出在了反转录上。
12楼2012-10-16 20:01:16
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zhangby2002

银虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by czcpudai at 2012-10-16 20:01:16
恩 ,您说的是有道理的,可是现在连内参都没有哎,我觉得我RNA应该是没有问题,都提取了那么多了,一开始也总是认为RNA不好,但是测完OD比值和跑完电泳后,我觉得不是RNA问题了,可能问题就出在了反转录上。...

我原来通常用18S和B-ACTIN,你可以合成,做分子必备的。祝成功
业精于勤,荒于嬉;行成于思,毁于随。
13楼2012-10-17 10:19:49
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zhangby2002 at 2012-10-16 18:59:41
反转好的cDNA用内参去P,如果出现内参条带,证明你反转结果很好。...

昨天P了一下,发现出来了内参基因,将TaqPlus酶的量加倍了。  但是电泳后感觉在内参下面还有模糊的条带,那个我觉得不是由于非特异性扩增引起的,还值得讨论一下,总之,非常感谢您!!
14楼2012-10-17 11:07:00
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tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-17 14:49:33
引用回帖:
10楼: Originally posted by czcpudai at 2012-10-16 18:52:28
谢谢!cDNA跑电泳怎么样检测其完整性?没听说过cDNA还要跑电泳的啊?电泳显示什么效果才说明cDNA是好的呢???
还有我想问一下,您的逆转录的试剂盒是哪家公司的??谢谢!...

取3-5微升cDNA跑电泳,看一下条带的弥散情况,应该是从低分子量到高分子量分布均匀。我自己曾经有过类似你的经历,需要重新克隆基因。从-80冰箱取的RNA,跑电泳,看不出降解,但是P不出来,后来检测了cDNA,cDNA不完整。后来重提RNA的。
我用的酶是promega的,一向是对折销售的那款,要另外订RNA酶抑制剂。
15楼2012-10-17 11:15:25
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tulip1213

银虫 (小有名气)

内参一般是组成表达的基因,内参P出来一定能p出目的基因?
16楼2012-10-17 11:19:32
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-17 11:15:25
取3-5微升cDNA跑电泳,看一下条带的弥散情况,应该是从低分子量到高分子量分布均匀。我自己曾经有过类似你的经历,需要重新克隆基因。从-80冰箱取的RNA,跑电泳,看不出降解,但是P不出来,后来检测了cDNA,cDNA不完 ...

恩 非常感谢!!! 您的意思还是RNA出现了问题,我还是两个方面走走看,一是重新提取RNA;另外换一下逆转录酶试一试,谢谢!
17楼2012-10-17 16:13:10
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-17 11:19:32
内参一般是组成表达的基因,内参P出来一定能p出目的基因?

我觉得内参出来, 目的基因不一定会有的
18楼2012-10-17 16:13:31
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Dr.G

新虫 (初入文坛)

TAKALA的试剂没有期望中的好,不要受伤了···
19楼2013-12-19 22:00:54
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