应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RT-PCR中逆转录试剂盒的问题！
52/1返回列表
查看: 3667  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 关于RT-PCR中逆转录试剂盒的问题！

各位做过逆转录的高手们，本人在2012年6月20日购买到RT试剂盒，到现在快有5个月了，8月份才开始使用。在8月份的时候做RT-PCR目的基因可以扩增出来，等到9月中旬的时候，一直扩增不出目的条带，检测RNAOD比值2.01，电泳效果完整性也比较好，5s不太亮。我想问一下各位，有没有可能是试剂盒中的逆转录酶的活力下降了，反复冻融后活力下降了？我买了后没有分装逆转录酶，只是用的时候从-20度取出来，放在冰盒上操作，再放回-20度。前后如此操作差不多有20次。原因是不是8月份的时候是夏天，气温挺高的（四大火炉之一），酶拿出来后温差太大，这样子，反复冻融操作出现活力下降了！？？ 请分析一下原因，谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2012-10-15 09:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhangby2002 at 2012-10-16 18:59:41
反转好的cDNA用内参去P,如果出现内参条带，证明你反转结果很好。...

恩 ，您说的是有道理的，可是现在连内参都没有哎，我觉得我RNA应该是没有问题，都提取了那么多了，一开始也总是认为RNA不好，但是测完OD比值和跑完电泳后，我觉得不是RNA问题了，可能问题就出在了反转录上。
赞一下 回复此楼
12楼2012-10-16 20:01:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

czcpudai

铜虫 (正式写手)
再追问一个问题，比如我现在使用的是Biouniquer的试剂盒（肯定比不过英俊和Takara等公司的），现在要想换一下逆转录酶，我想换Takara的逆转录酶，
请问这个可以和Biouniquer的试剂盒想匹配吗？？？ 有没有仁兄经历过这种情况的？？？
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-15 09:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-15 13:53:06
你的酶都是在冰上操作的话问题应该不大。在-20度的时候酶的stock里有甘油，也不会冻上的，所以不存在冻融问题。只要你做的时候才把酶拿出冰箱，在冰盒上取用后迅速放回冰箱就可以了。你所谓的P不出来是指反转后的cDNA为模板，P不出目的基因还是P什么都没有呢？比如说内参什么的？还有就是你提的RNA是不是立即做了反转录，有没有反复冻融？你做的是什么物种，一般mRNA的半寿期是多少？
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-15 09:26:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by czcpudai at 2012-10-15 09:15:19
再追问一个问题，比如我现在使用的是Biouniquer的试剂盒（肯定比不过英俊和Takara等公司的），现在要想换一下逆转录酶，我想换Takara的逆转录酶，
请问这个可以和Biouniquer的试剂盒想匹配吗？？？ 有没有仁兄经历 ...

公司间的试剂盒不能混搭。而且逆转录的protocol各个公司的也不完全一样。
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-15 09:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 25/1250 2026-04-17 15:45 by qzxyhcsy
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 295分求调剂 +3 ?要上岸? 2026-04-17 3/150 2026-04-17 13:34 by 学员JpLReM
[考研] 279求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-11 13/650 2026-04-17 10:38 by cuisz
[考研] 22408 312求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-14 25/1250 2026-04-16 21:21 by Art1977
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-16 15:18 by jiahl2024
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 求调剂 +11 小聂爱学习 2026-04-11 15/750 2026-04-15 21:57 by noqvsozv
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 293求调剂 +16 我爱高数高数爱� 2026-04-12 18/900 2026-04-13 21:47 by 学员JpLReM
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭