应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RT-PCR中逆转录试剂盒的问题！
52/1返回列表
查看: 3471  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 关于RT-PCR中逆转录试剂盒的问题！

各位做过逆转录的高手们，本人在2012年6月20日购买到RT试剂盒，到现在快有5个月了，8月份才开始使用。在8月份的时候做RT-PCR目的基因可以扩增出来，等到9月中旬的时候，一直扩增不出目的条带，检测RNAOD比值2.01，电泳效果完整性也比较好，5s不太亮。我想问一下各位，有没有可能是试剂盒中的逆转录酶的活力下降了，反复冻融后活力下降了？我买了后没有分装逆转录酶，只是用的时候从-20度取出来，放在冰盒上操作，再放回-20度。前后如此操作差不多有20次。原因是不是8月份的时候是夏天，气温挺高的（四大火炉之一），酶拿出来后温差太大，这样子，反复冻融操作出现活力下降了！？？ 请分析一下原因，谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2012-10-15 09:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangby2002

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by czcpudai at 2012-10-16 18:52:28
谢谢！cDNA跑电泳怎么样检测其完整性？没听说过cDNA还要跑电泳的啊？电泳显示什么效果才说明cDNA是好的呢？？？
还有我想问一下，您的逆转录的试剂盒是哪家公司的？？谢谢！...

反转好的cDNA用内参去P,如果出现内参条带，证明你反转结果很好。
赞一下 回复此楼
业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
11楼2012-10-16 18:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

czcpudai

铜虫 (正式写手)
再追问一个问题，比如我现在使用的是Biouniquer的试剂盒（肯定比不过英俊和Takara等公司的），现在要想换一下逆转录酶，我想换Takara的逆转录酶，
请问这个可以和Biouniquer的试剂盒想匹配吗？？？ 有没有仁兄经历过这种情况的？？？
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-15 09:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-15 13:53:06
你的酶都是在冰上操作的话问题应该不大。在-20度的时候酶的stock里有甘油，也不会冻上的，所以不存在冻融问题。只要你做的时候才把酶拿出冰箱，在冰盒上取用后迅速放回冰箱就可以了。你所谓的P不出来是指反转后的cDNA为模板，P不出目的基因还是P什么都没有呢？比如说内参什么的？还有就是你提的RNA是不是立即做了反转录，有没有反复冻融？你做的是什么物种，一般mRNA的半寿期是多少？
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-15 09:26:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by czcpudai at 2012-10-15 09:15:19
再追问一个问题，比如我现在使用的是Biouniquer的试剂盒（肯定比不过英俊和Takara等公司的），现在要想换一下逆转录酶，我想换Takara的逆转录酶，
请问这个可以和Biouniquer的试剂盒想匹配吗？？？ 有没有仁兄经历 ...

公司间的试剂盒不能混搭。而且逆转录的protocol各个公司的也不完全一样。
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-15 09:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭